花椒果实发育过程中香气成分变化及其相关基因表达水平研究.pdfVIP

摘 摘 花椒 (Zanthoxylum bungeanum Maxim.) 属芸科植物，在中国广泛种植。其突 出特点是浓的气。产生种气的主成分是挥发性类化合物。气作为花椒 最的特征之一，也是价其品的指标，然而关于花椒气的分子合成机制 方处于研究空白段。在本研究中，用城大红花椒和府花椒的不同发育 时期果实为研究材料， 在 KEGG 数据库中挑出植物类代上的 16 个关 基因引物。 用空固相微取- 气相色- 联用技术 (HS-SPME-GC-MS) 、基因克、烟草瞬时、原核体外活检测，RT-qPCR 和生物信息学等技术来开展研究。主研究结果如下： 1. GC-MS 结果显示：两个花椒品种的挥发性类化合物变化势是一致的。 着果实成熟，类化合物渐积累，至第三个时期 （发育中期）到峰值，后渐 减少。含最多的类是单，其中-pinene 含最，在城大红和府花椒的 含中分别为24.74% 和20.78% 。总的来，城大红中挥发性类物含占 62%，府花椒占41% 。 2. RT-qPCR 对挑的基因的检测，发现大分基因上。其 中ZbDXS 自的相对最，是MEP 径上关的，MEP 径上的基因 相对于MVA 径，明花椒类代可能以MEP 径为主。 3. 依据上结果，对 MEP 径上游关，1-脱氧木糖-5-磷合成 （DXS ）和 MVA 径下游关，法呢基焦磷合（FPS ）功能分析。 基于先前的录组数据，成功从花椒中克出ZbDXS 和ZbFPS 的CDS 序列，度分 别为2172 bp 和1029 bp ， 编码724 个和343 个氨基。 4. 生信分析明，ZbDXS 属于亲水性白，没有信号肽及膜结构域，亚细胞 定位测其定位于线粒体上。系统发育树分析显示ZbDXS 与多种植物的 DXS2 家族 成员聚在一个大分支上，在此分支内又与橘DXS2 度聚在一小分支中，推 测基因序列具有 DXS2 类型基因的功能，参与花椒类化合物的代程；ZbFPS 属于稳定白及亲水性白，不含信号肽和膜结构域，系统发育树分析显示ZbFPS 与椒、番茄、和橘亲缘关系最，聚在一个大的分支，支持率为100%， 并且与其中的橘属植物度聚在一小分支，与植物系统发育的亲缘关系相一致。 5. 体外活实结果显示：纯化白ZbDXS ， ZbFPS 具有DXS 和FPS 的功能。分别瞬时ZbDXS 和ZbFPS 于本式烟草叶片中，发现使烟草的类含 增加。RT-qPCR 对两个基因模式研究发现，其均在花椒不同组织中稳定 I 北农林科技大学硕士学位文 。ZbDXS 和ZbFPS 均在果实中的相对最，其中ZbDXS 在根中的相对 最低，ZbFPS 在茎中的相对最低。 关：花椒；类；代；DXS ；FPS II 目录 录 摘I ABSTRACT III 一 文 1 1.1 花椒概 1 1.1.1 花椒的分布与特性 1 1.1.2 花椒气的应用现状 1 1.2 果实气研究概 3 1.2.1 果实气的组成成分 3 1.2.2 果实气物分子生物学研究展 4 1.3 类合成关基因的概 5 1.3.1 MVA 径关研究展 5 1.3.2 MEP 径关研究展 6 1.4 本研究的意义与内容 8 1.4.1 研究目的与意义 8 1.4.2 研究内容 9 二 不同发时期实含变化 10 2.1 材料和方法 10 2.1.1 材料与仪器 10 2.1.2 果实挥发性物的SPME 取样 1