烟叶微生物多样性及其对烟叶发酵品质的影响研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 微生物在烟叶醇化过程中扮演着十分重要的角色，利用微生物醇化烟叶，能显著 提高烟叶发酵品质，减少烟叶中大分子物质，使烟气饱满醇和，增加其香气，余味纯 净舒适。本研究采用云南烟草主要种植区的烟草根际土壤，经过高通量测序后，通过 分析揭示了不同地区根际微生物群落的多样性。同时利用云南、津巴布韦、津巴布韦、 福建、贵州、正宇、湖北十堰和湖南郴州等地区的陈化烤烟烟叶及云南主要烟草种植 区的新鲜烟叶和土壤，经过初步分离微生物，根据微生物产水解酶的能力进行筛选， 得到优良菌株，通过鉴定确定其分子生物学地位，并将其配伍制备为复合菌剂，作用 于烟叶表面醇化，得到能显著改善烟草品质的复合菌剂。具体结果如下： 1）根际微生物对植物生长和品质有重要影响。本研究采集了云南省 10 个烟区的烟 叶和烟草根际土壤样品，研究了根际微生物、土壤理化特性和烟叶性状之间的相互作 用。采用高通量测序方法测定样品，冗余分析(RDA)表明，大多数土壤理化性质对根际 微生物群落有显著影响。相关分析和RDA 分析均表明，速效钾(AK)和酸杆菌-GP3 与 烟叶性状呈显著正相关；地形、海拔和轮作对根际微生物群落的影响更为显著。方差 分配分析表明，根际微生物对烟叶品质的影响较大。总体而言，烟草根际微生物多样 性存在较大差异，微生物多样性、土壤理化特性和烟叶性状之间存在复杂的交互作用。 研究结果对促进烟叶生长、提高烟叶品质具有一定的参考价值。 2 ）不同烟叶和不同烟草根际土壤中微生物去群落也不尽相同，本研究采集了云 南、津巴布韦、津巴布韦、福建、贵州、正宇、湖北十堰和湖南郴州等地区的陈化烤 烟烟叶127 份样品及云南主要烟草种植区的新鲜烟叶和烟草根际土壤个23 份样品，通 过分离微生物的方法分离样品，结果如下：127 份陈化烟叶样品中分离得到1135 株微 生物，其中细菌1035 株，酵母菌5 株，霉菌95 株。从23 份新鲜烟叶和烟草根际土壤 样品中共分离到284 株细菌，65 株真菌，102 株放线菌，细菌属于优势微生物。通过 进行分子生物学鉴定，陈化烟叶样品分离得到 156 株芽孢杆菌，分为 19 种，其中B. subtilis 在多数样品中存在。新鲜烟叶和土壤中分离得到的284 株细菌分为27 个属，96 种，其中芽孢杆菌属Bacillus 包含有34 个不同的种类，为优势种群。 3 ）烟叶表面存在大量微生物，这些微生物的生理活动能够将烟叶中含有的许多生 物大分子化合物转化为醇类、醛类、酯类、酮类和有机酸等小分子化合物，从而提升 烟叶品质。本研究对分离得到的细菌进行产水解酶能力的测定，从陈化烟叶1035 株细 菌中筛选出24 株产水解酶能力较好的菌株，从新鲜烟叶和烟草根际土壤284 株细菌中 筛选出20 株产水解酶能力较好的菌株，将得到的共44 株细菌进行单菌株烟丝发酵， I 西北农林科技大学硕士学位论文 结果显示，菌株 16-2 、YN36-5、YN21-1、HJ39-9 和HJ8-8 综合效果最好，对烟丝发 酵品质有较大的影响，将菌株 16-2 、YN36-5、YN21-1、HJ39-9 和 HJ8-8 按比例 1:1 配伍，作用于烟叶上，由感官评价得出效果较好的3 套配伍菌剂，分别为复合菌株T1 （16-2 ：YN21-1）、T6 （YN36-5 ：YN21-1）和 T7 （HJ8-8：YN21-1），同时烟丝发 酵后的理化性质也存在明显的变化。 4 ）为进一步研究5 株优良菌株，本研究对5 株菌进行了革兰氏染色、生理生化特 性测定和基于 16S rDNA 构建系统发育树以及优化其生长条件等试验，结果显示： YN16-2 ，YN36-5 和HJ8-8 菌体呈紫色，表明该3 株细菌菌株均为革兰氏阳性菌，YN21-1 和HJ39-9 菌体呈红色，表明该2 株细菌菌株均为革兰氏阴性菌。通过16S r RNA 序列 相似性以及系统进化关系可初步确定16-2 为蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus ，菌株YN36-5 为苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis ，HJ8-8 为内生芽孢杆菌Bacillus endophyticus ， YN21-1 为黄褐假单胞菌 Pseudomonas