烟草DH群体构建与毒素胁迫杂种后代抗黑胫病定向选择.pdfVIP

摘 要 摘 要 烟草是我国乃至世界上重要的经济作物，在国家财政收入和经济的持续稳定发展 中发挥着重要作用。目前烟草生产上面临着病虫危害严重、主栽品种抗性低下以及国 内自主研发推广的新品种较少等许多不足。双单倍体 （DH ）群体作为一种重要的遗传 分析群体，在作物重要性状的QTL 分析和遗传图谱构建等领域已被广泛应用；黑胫病 是烟草生产中极易发生且危害程度严重的一种真菌性病害，众多研究表明，在防治作 物病害过程中栽培抗病品种是最经济有效的措施。本研究通过对花药诱导培养基的设 计，探索了影响烟草花药直接雄核发育的条件和因素，进行了培养基添加秋水仙素对 单倍体烟草染色体加倍效果研究和烟草 DH 群体构建；同时进行烟草黑胫病菌产毒培 养、毒素提取以及毒素胁迫烟草杂种分离世代（F ）定向抗病基因型选择及苗期抗病 2 性鉴定，研究了毒素胁迫定向选择技术在烟草黑胫病抗性育种中的可行性。主要获得 以下研究结果： 1. 不依赖于供体基因型烟草花药直接雄核发育的最佳培养基为：Nitsch H + 15%椰 子乳+ 0.1 mg/L IAA + 0.1 mg/L 6-BA + 30.0 g/L 蔗糖+ 6.5 g/L 琼脂，pH 5.6 。F1 花粉胚 诱导率在 ‘TMK-12×吉烟 5 号’、‘K326×双抗 70 ’和 ‘NC71×净叶黄’3 个杂交组合 中分别为23.28 ％、26.64 ％和28.07 ％，分别较对照高 15.47%、19.27%和13.96% 。 2. 秋水仙素对烟草单倍体幼苗有毒性作用，供试3 个杂交组合的幼苗存活率随着 秋水仙素处理时间延长和处理浓度增大均呈下降趋势，高浓度秋水仙素对单倍体幼苗 毒害严重，加倍效果差，以0.02%秋水仙素处理4 d 对烟草单倍体的染色体加倍效果最 好，达50.60% 。 3. 经过诱导烟草花药直接雄核发育、单倍体加倍、倍性鉴定、叶片分化培养及二 次加倍，建立了2 个分别含92 和53 个DH 系的烟草DH 群体。 4. 黑胫病菌毒素抑制烟草种子胚根生长，抑制效果与烟草品种对黑胫病的抗性相 关，抗性品种抗抑制能力强，50%的病菌毒素胁迫烟草种子 15 d，不同抗性烟草品种 的胚根生长差异显著，是能有效区分烟草抗感基因型的重要指标。 5. 50%的病菌毒素胁迫 ‘NC55-1×K326’、‘K326×云烟 99 ’、‘NC71×云烟 99 ’3 个烟草杂交组合F2 代种子，分别有41.75% 、35.13%和24.50% 的幼苗胚根生长正常。 进一步做苗期温室抗黑胫病鉴定，3 个杂交组合发病率较对照分别降低15.32%、22.22% 和19.29% ；病情指数较对照分别降低12.59%、15.43%、14.18% 。 关键词：普通烟草；雄核发育；染色体加倍；DH 群体；黑胫病；毒素胁迫 I 目 录 目 录 摘 要I ABSTRACT III 第一章 文献综述 1 1.1 烟草及我国烟草育种概况 1 1.2 植物组织与细胞培养 2 1.3 烟草花药培养 2 1.3.1 烟草花药直接雄核发育的基础研究 2 1.3.2 直接雄核发育的阶段性 5 1.3.3 烟草花药直接雄核发育的应用 5 1.4 烟草染色体加倍与DH 群体的建立 6 1.4.1 烟草单倍体的染色体加倍 6 1.4.2 染色体倍性检测 6 1.4.3 烟草DH 群体的应用 7 1.5 烟草黑胫病概况 8 1.5.1 烟草黑胫病的症状 8 1.5.2 烟草黑胫病致病机理 8 1.5.3 烟草黑胫病的