猪源大肠埃希菌分离株血清型、耐药性分析和整合子—基因盒基因检测.pdfVIP

摘 要 摘 要 大肠埃希菌 （Escherichia coli ，E.coli ）是最常见的革兰阴性菌病原体，容易受环 境压力影响，发生各种改变。大肠埃希菌有些菌株的血清型为人畜共患血清型，需要 进行监控，以预防其对公共卫生可能带来的危害。为预防和治疗各种细菌性疾病，抗 生素被广泛应用，一些抗生素还被用作动物养殖中的促生长发育饲料添加剂。但是不 正当的使用导致动物体内菌株对抗菌药物的抗性快速上升。近年来，世界范围内发生 了多起由具有多重耐药性的菌株引起的食源性或水源性疾病的暴发。细菌整合子-基 因盒具有灵活捕获和传递耐药基因的特点，其能存在于细菌的染色体和移动元件上， 对细菌耐药性产生具有重要作用。I 类整合子有两个保守区段 （5’CS 和 3’-CS ）和保守 区段中间的可变区，其中 5’-CS 部分包括整合酶基因、启动子基因和重组位点 attI， 3’-CS 包含编码消毒剂抗性的基因 qacE△1-sulI 功能未知的 orf5 基因；基因盒通过 attIxattC 位点结合等方式，由自由状态时的环状基因变为线性基因，整合入整合子的 可变区，并利用整合子上的启动子进行表达。通过整合子-基因盒系统细菌能够获得 对多种抗菌药物及消毒剂的抗性，这种机制也被认为是细菌的适应性进化机制。 为了解我国不同地 区临床健康猪群肠道中大肠埃希菌的血清型、耐药表型及菌株 耐药与 I 类整合子-基因盒之间的关系，本研究从陕西、山西、河北和安徽采集的 330 份肛拭子样品中分离大肠埃希菌，并进行血清学鉴定。采用药敏纸片扩散法(Kirby- Bauer 法)对分离株进行抗菌药物的敏感性检测， PCR 检测分离株中 I 类整合酶基因 （Intl1 ）的发生率，然后扩增并克隆I 类整合子可变区基因序列，扩增序列与 NCBI 中 已知序列进行同源性比对，确定基因盒类型，最后统计分析大肠埃希菌的耐药表型特 征与血清型、I 类整合子-基因盒系统三者的关系。获得如下研究结果： （1）大肠埃希菌的分离及血清型鉴定。从河北、陕西、山西、安徽4 个省份的生 猪养殖场、生猪屠宰场采集临床健康猪肛门拭子 330 份，分离得到 264 株大肠埃希 菌，分离率为 80% ；对分离菌株进行 O8 、O9 、O20 、O45 、O64 、O101 、O138 、 O141、O147、O149 和 O157 抗原单因子血清鉴定，确定了 189 株分离菌株的血清型， 优势血清型分别为 O8 （18.5%）、O138 （18.5%）和 O101 （12.2%），检出度最低 的 血清型为 O45 （2.7% ）。 （2 ）264 株大肠杆菌对 18 种抗菌药物药物敏感性试验表明，分离株对 四环素 （63.6 ％）、多西霉素 （62.9 ％）和磺胺异恶唑 （59.5 ％）耐药率较高 ；对红霉素 （22.3% ）、新霉素 （22.3% ）、环丙沙星 （13.3％）和诺氟沙星 （11.4％）敏感率较 高。184 株分离菌 （69.7 ％）存在多重耐药 （MDR ），11 种 MDR 模式涵盖 3~ 13 种抗 生素，最常见的 MDR 类型为 6~7 种抗菌药物 。 I 西北农林科技大学硕士学位论文 （3 ）经检测分离株 I 类整合酶及基因盒基因，发现共有 197 株分离菌携带 I 类整 合酶 （74.6 ％），整合酶阳性菌株对多西环素 （70.1 ％），四环素 （69.0 ％），复方新 诺明（67.0 ％），阿莫西林（66.5 ％），磺胺异恶唑 （64.5 ％），氟苯尼考 （54.3 ％） 和氨苄西林（53.3 ％）的耐药率较高 。比对整合酶阳性与阴性菌株在耐药表型上的差 别，发现除卡那霉素、丁胺卡那和磺胺异恶唑三种抗生素外，整