9噬菌体效价学习资料.pdf

噬菌体效价的测定 一、实验目的 1、了解温和噬菌体与宿主菌之间的溶原关系； 2、学习利用溶原性细菌制备噬菌体裂解液方法； 3 、学习双层平板法测定噬菌体效价的方法； 4 、以局限性转导为例来，学习转导的基本原理；掌握转导实 验的基本方法，测定转导率。 2 二、实验原理 ▪ 细菌转导：由噬菌体为媒介将一个细胞的遗传物质转移给另 一个细胞的过程。 ▪ 转导可分为局限性转导和普遍性转导两大类。 3 普遍性转导： ▪ 噬菌体能转导供体细菌的任何基因； 如鼠伤寒沙门氏菌的P22噬菌体、大肠 杆菌的P1噬菌体、枯草杆菌的PBS1、 PBS2、SP10噬菌体等； ▪ 其机制在于这些噬菌体可以整合在供 体菌染色体DNA的任何位置上。 P22噬菌体 4 局限性转导： 噬菌体只能转导供体菌染色体DNA上的某些特定基因； 如λ噬菌体只能转导供体菌E.coli K12染色体上的半乳糖基因 和生物素基因。 产生局限性转导的原因在于这些噬菌体仅能整合在供体菌染 色体DNA 的特定位置上。 5 ▪ 转导实验中常用的是λ噬菌体，它能整合在大肠杆菌染色体DNA上的半乳糖基因 （gal）和生物素基因(bio) 之间，因此，它能转导gal基因又能转导bio基因。 + + λ (dbio ) λ (dgal ) λ原噬菌体 细菌染色体 6 噬菌体的溶原 ▪ 温和噬菌体侵染细胞后整合到宿主的染色体 组中，使宿主细菌成为溶源性细菌。 ▪ 溶源性细菌一般在生长繁殖过程中可自发的 发生极低频率的裂解，释放出具有感染力的 噬菌体。可以用物理或化学的方法诱导，使 其大部分或全部裂解。 ▪ 检测时需要有对此温和噬菌体敏感的细胞， 即溶源性细菌释放的噬菌体对于该细胞而言 是烈性噬菌体，被称为受体菌。 7 本实验所用的供体菌 供体菌E.coli k12(λ) gal+ + λ(dgal ) λ ▪ 是一种双重溶源菌 + ▪ 此菌中λ噬菌体与gal 基 宿主菌染色体 因紧密连锁，当其受紫 外线照射后即产生裂解 反应，噬菌体被诱发释 + 裂解液中(dgal ) (转导噬菌体) 占50% 放，以一定的比例形成 (正常噬菌体) 占50% 带有gal基因的转导噬菌 体