甘遂2个ATG8同源基因的表达分析及愈伤培养和离体快繁培养.pdfVIP

摘要 甘遂2 个ATG8 同源基因的表达分析 及愈伤培养和离体快繁培养 （西北大学 生命科学学院，西安，710069） 摘要 Euphorbiakansui Liou Euphorbiaceae Euphorbia 甘遂 （ ）是大戟科 （ ）大戟属 （ ） 的多年生草本植物，是我国特有的一种传统中药，入药部位为其块根，主治水肿、咳 7 8 12 喘、肿瘤等病症。每年 、 月份幼苗由种子或留在地下的块根形成， 月份生长停 止，完成营养生长，到次年3 月份幼苗出土，4 月份开花，5 月底果实成熟，完成生 殖生长。甘遂全株各部位均有白色乳汁，其为乳汁管的细胞质。甘遂的乳汁管为无节 分枝乳汁管，其有效成分如萜类和类黄酮等物质大多产生并储存于乳汁中，因此研究 乳汁管的发育具有很重要的理论和实践意义。细胞自噬是一种高度保守的物质循环过 程，主要是调控长寿命蛋白质和功能异常的细胞器的降解。我们课题组在甘遂的乳汁 管中观察到线粒体、质体等细胞器与类似溶酶体的小型酸性细胞器融合的现象，并在 甘遂转录组数据中发现了自噬相关基因。基于此，我们根据甘遂转录组信息克隆了自 噬相关蛋白ATG8家族的2 个同源基因 （ATG8c和ATG8f）的CDS序列，并分析了 其在根、茎、叶和乳汁中的表达，同时建立了甘遂快繁生芽和生根以及愈伤组织培养 的最佳条件，为后续甘遂乳汁管自噬发生模式、构建ATG8转基因体系及深入研究乳 汁管自噬发生机理奠定基础。研究结果如下： （1）ATG8c 的编码序列 （CDS）为381bp，编码126个氨基酸，预测其蛋白分 14.53kDa pI 7.89 ATG8f CDS 369bp 122 子质量为 ，理论等电点 （ ）为 ； 的 为 ，编码 个氨基酸，预测其蛋白分子质量为14.08kDa，pI 为7.85。同源比对与进化树证明2 个基因保守性很高。通过表达模式的分析发现，ATG8f 的表达量在根、茎、叶和乳汁 中均比ATG8c 高，其中ATG8f在叶中的表达量最高，ATG8c在乳汁中最高。 2 70% 10 s （）甘遂外植体消毒：将植物园采集的叶片或茎段清洗干净， 乙醇浸泡 后，无菌水洗2 次，接着0.08%升汞消毒：叶片消毒5min，茎段消毒8min，无菌水 5 洗 遍。 （3）茎段 （无腋芽）和叶片均用MS+ 6-BA2.5mg/L+ 2,4-D 2.0mg/L 为愈伤诱 I 西北大学硕士学位论文 60.88% 45.33% 导的最佳培养基，诱导率分别是 和 ；以带有腋芽的幼嫩茎段为外植体， 诱导丛生芽，最佳培养基为MS+ 6-BA 1.0mg/L+ IAA3.0mg/L，诱导率为89.46%， 增殖系数为8.93；壮苗培养基为MS + 6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L，诱导率为 89.39%；最后较粗壮的苗在1/2MS+IBA0.5mg/L 或1/2MS+ IBA 1.0mg/L 培养基中 28.15% 35.01% 3.75 1.53 诱导生根，生根率分别是 和 ，增殖系数分别为 和 。