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蛋白质含量的测定 1 实验背景 蛋白质含量测定方法 凯氏定氮法 紫外光吸收法 Folin-酚试剂法 二喹啉甲酸(BCA)法 考马斯亮蓝G-250法 1 实验背景 凯氏定氮法  蛋白质是含氮的有机化合物  蛋白质与硫酸和催化剂一同加热，蛋白质分解，分解 的氨与硫酸结合生成硫酸铵  然后经强碱碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫 酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系 数，即为蛋白质含量 蛋白质含量（%）=总氮量（%）×K （K=6.25） 式中K 为换算因数，因蛋白质的类型不同稍有差别 1 实验背景  蛋白质分子中酪氨酸、色氨酸和苯丙 氨酸残基的苯环含有共轭双键  蛋白质具有吸收紫外光的性质，吸收 紫外光吸收法 峰在280 nm处  在一种蛋白质中，这几种氨基酸含量 是固定的，所以280 nm的吸光度与蛋 白质浓度成正比  可用于蛋白质含量的测定 1 实验背景  A= εcL A是吸光度  朗伯-比尔定律 ε是摩尔吸光系数L/(mol·cm) L是比色杯内径（cm） c 是蛋白质浓度（mol/L） 1 实验背景  普通估测  280 nm和260 nm吸收差法也常用于蛋白质含量的测定  在被测样品中常含有核酸  利用核酸吸光度在260 nm时大于280 nm，而蛋白质吸光度 在280 nm时大于260 nm的特性，分别测定280 nm和260 nm波长下的吸光度（分别以A280和A260表示）  按下列经验公式计算蛋白质的含量： 蛋白质含量（mg/mL ) = 1.45A280 - 0.74A260 1 实验背景  碱性铜试剂和磷钼酸及磷钨酸的混合试剂  碱性铜试剂与蛋白质产生双缩脲反应，产 生的蛋白质-铜络合物中的酚基（酪氨酸、 Folin-酚试剂法 (Lowry法) 色氨酸），在碱性条件下将磷钼酸和磷钨 酸还原为蓝色的钼蓝和钨蓝，产物颜色的 深浅与蛋白质的浓度成正比，在650 nm 左右波长下测定吸光度，即可推算出蛋白 质含量。 1 实验背景  在碱性条件下，蛋白质分子中的肽键结 2+ 构能与Cu 络合生成络合物，同时将