细菌γ-PGA_CS_Fe3O4纳米粒子的制备及其应用研究.pdfVIP

摘要 摘 要 本课题首先研究了以地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)WBL-3 为发酵菌株，使用小 型发酵罐生产聚γ-谷氨酸（Poly-L-glutamicacid,γ-PGA），并降解为小分子量γ-PGA，然后 与壳寡糖（Chitooligosaccharide,CS）交联包覆于超顺磁性四氧化三铁（Fe O ）表面，制 3 4 备γ-PGA/CS/Fe O 纳米粒子（PCN）。从西兰花的种子中提取及分离纯化抗癌活性物质莱 3 4 菔硫烷（1-异硫氰酸-4- 甲磺酰基丁烷，英文名 Sulforaphane ，SFN ），制备了 SFN/γ-PGA/CS/Fe O 纳米粒子（PCSN），并研究了其对人肺癌A549 细胞的治疗效果， 3 4 Cephalexin CLX Doxorubicin DOX 最后对负载头孢氨苄（ ， ）和盐酸阿霉素（ ， ）的 CLX/γ-PGA/CS/Fe O 纳米粒子（PCCN）、DOX/γ-PGA/CS/Fe O 纳米粒子（PCDN）进 3 4 3 4 行了研究。 首先将活化后的菌株WBL-3 在摇瓶中进行培养，测量菌株生长曲线和γ-PGA 产量曲 线，确定进罐时间和发酵时间；进罐后继续测量生长曲线和产物曲线，监控菌株生长情况 和产量趋势。收集粗产物，醇沉后使用透析袋去除小分子杂质，在pH 为3.5、温度为120℃ 1.5h 40-80KD γ-PGA CS γ-PGA 的条件下降解 ，得分子量在 范围内的小分子量 。将 与 溶于 水中，通过交联法将CS 与γ-PGA 这两种生物材料连接，包覆于Fe O 表面制备出PCN。 3 4 用透射电子显微镜(TEM)观察形貌，平均粒径为43nm 左右；真空冷冻干燥后，用傅里叶 (FTIR) CS γ-PGA 红外光谱 定性检测，表明 的氨基和 的羧基反应，成功交联。 使用高效液相色谱技术建立了SFN含量体外测定的方法。采用浸提法从西兰花种子中 提取了SFN粗品，经硅胶柱分离出纯化制品。用HPLC 分析SFN 的含量，收集含有SFN 的馏分，再用HPLC 分析SFN 的纯度。旋转蒸发后，真空冷冻干燥，用FTIR 定性检测。 结果表明提取物为SFN，纯度为87.50%，每克西兰花种子中SFN 的提取得率为5.91mg。 用提取纯化的SFN制备PCSN，平均粒径为75nm 左右，载药量为30%左右，包封率为90% 左右，可缓释72h 以上，累积释放率为87.9%左右。然后采用 MTT 法检测PCSN 对人肺 癌细胞A549 生长的影响；采用 Transwell 法检测PCSN 对人肺癌细胞A549 迁移和侵袭能 力的影响。结果表明PCN 无细胞毒性，PCSN 可有效抑制A549 细胞生长、迁移和侵袭。 PCN CLX DOX 最后通过体外缓释实验，探究 携带其他药物的能力。主要探究了负载 和 后的超顺磁性纳米粒子（PCCN,PCDN）的载药量，包封率和缓释能力。对于CLX，缓释 能力较差，累积释放率为40%左右，而携带DOX，则表现出优良的缓释效果。 关键词：细菌γ-PGA/CS/Fe O 纳米粒子；细胞毒性；载药量；包封率；释放率