实验报告八化学发光.pdf

课程名称：生物仪器分析 指导老师： 成绩： __________________________ 实验名称： 化学发光免疫分析技术 实验类型：探究 同组学生姓名： 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、主要仪器设备（必填） 四、操作方法和实验步骤（必填） 五、实验数据记录和处理 六、实验结果与分析 七、讨论、心得 装 一、实验目的和要求 1、掌握超灵敏化学发光成像仪的操作方法。 订 二、实验内容和原理 内容： 1、将酶点到 NC膜上，进行化学发光反应。 线 原理： 1、发光免疫分析 是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一种新的检测微量抗原或抗体的新型标记免疫分析技术。 化学发光免疫分析包含两个部分 , 即免疫反应系统和化学发光分析系统。 化学发光分析系统是利用化学 发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化 , 形成一个激发态的中间体 , 当这种激发态中间体回到稳定 的基态时 , 同时发射出光子 (hM) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物 质( 在反应剂激发下生成激发态中间体 ) 直接标记在抗原 ( 化学发光免疫分析 ) 或抗体 ( 免疫化学发光分 析) 上 , 或酶作用于发光底物。 2、发光 是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态（较低能级）跃迁到激发态（较高能级），然后再返 回到基态，并释放光子的过程。 3、辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析 该分析系统采用辣根过氧化物酶（ HRP）标记抗体 ( 或抗原 ) ，在与反应体系中的待测标本和固相载 体发生免疫反应后，形成固相包被抗体 - 待测抗原 - 酶（ HRP）标记抗体复合物，这时加入鲁米诺发光剂、 H2O2和化学发光增强剂使产生化学发光。 4、鲁米诺发光原理 三、主要仪器设备 超灵敏化学发光成像仪、 NC膜 四、操作方法和实验步骤 1 、点酶在 NC膜上。 2 、加入发光底物 A 及发光底物 B 溶液于膜上， 1:1 混合后立即使用，置室温反应。可在加入底物 后 2～30 分钟读取发光信号。 3 、打开分析仪器的电源、仪器自检后、调整机器的到待机工作状态。 4 、检测 5 、图像捕获机器的操作见仪器说明书。 五、实验数据记录和处理 图 1 第一张 NC膜发光情况 图 2 第二张 NC膜发光情况 六、实验结果与分析 1、第一张不能看见我们组画的图案，我们组画图案的部位呈现一片空白的状态。这可能是反应的 时候，这个地方跟反应用的袋子贴合，导致没有和反映也充分接触，导致没有显色。 2、第二张可以清楚的看到我们组画的图案。 3、反应的时候必须等到 NC膜上的液体完全干透，否则会导致图案模糊不清，也会污染反应液。 4、两张膜上都有一些非常黑的点，这可能是由于画图案的时候，没有控制好蛋白用量导致。蛋白 量过多就会导致过度曝光。 5、画图案时一定要戴手套，否则手上的蛋白很可能对实验结果产生影响。 七、讨论、心得 1、蛋白质实验 将蛋白质进行电泳分离， 再转印到 NC膜上， 经 1%BSA封闭半小时、 然后用一抗识别膜上的蛋白质， 37 度反应 1 小时，再经酶标二抗识别 NC膜上结合的一抗，洗膜后才能进行化学发光反应。 2、核酸实验 将核酸进行电泳分离，再转印到 NC膜或者尼龙膜上，变性后来，经无关核酸及 5%左右 BSA封闭半 小时、然后用核酸探针识别膜上的核酸条带， 37 度反应 1 小时，再经酶标二抗识别 NC膜上结合的核酸 探针， 其探针中通常常有小分子半抗原标记，