薄层色谱、柱色谱、纸色谱.pdf

薄层色谱 柱色谱 纸色谱 化学与药学院 有机化学教研室 目录/CONTENTS 01 实验目的 02 实验原理 03 实验内容 04 思考题 一、实验目的 学习和掌握用薄层色谱法、柱色 谱法、纸色谱法分离有机化合物的基本 原理和实验技术。 二、实验原理 色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能 （即分配）的不同，或其他亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该 种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。流动的混合 物溶液称为流动相；固定的物质称为固定相。 薄层色谱是把吸附剂或支持剂铺在玻璃或铝箔上，将样品点在其上，然后 用溶剂展开，使样品中各组分相互分离的方法。 柱色谱是在一根玻璃管或金属管中进行的色谱技术，将吸附剂填充到管中 使之成为柱状，混合样品加在色谱柱的上端，流动相从色谱柱顶端流经色 谱柱从而将各组分分开。 纸色谱是以滤纸为支持物的色谱方法，原理比较复杂，一般认为属于分配 色谱。 三、实验内容 用薄层色谱法分离和鉴定醛酮 制板 洗净晾干4块载玻片备用； 称取2克硅胶G倒入烧杯中，加入0.5%羧甲基纤维素钠溶液5-6 mL ，充分搅拌， 调成适宜的均匀糊状物，立即按湿铺法铺制薄层板，平放，晾干备用。 三、实验内容 用薄层色谱法分离和鉴定醛酮 点样 在距薄板底端约1cm处，用铅笔轻轻画一条与底边平行的直线，并确定各 样品点样位置。 然后分别用毛细管吸取香草醛溶液、茴香醛溶液、二者的混合 溶液进行点样，样点直径小于3mm ，三个样点之间的距离约0.7cm ，距薄层两 边距离约0.5cm ，晾干。 样点 点样线 三、实验内容 用薄层色谱法分离和鉴定醛酮 展开和显色 用上行法展开，待展开剂上升到距顶端1cm处时取出，用铅笔画出溶剂 前沿，稍等，待溶剂挥发而未干时，喷洒0.4% 2,4-二硝基苯肼溶液，有橙色 斑点显示。 溶剂前沿 三、实验内容 用薄层色谱法分离和鉴定醛酮 测量比移值（R ） f 用铅笔将所有斑点的轮廓描出来，并确定出各斑点的重心位置，该点即为 斑点位置。分别量出点样点到溶剂前沿、各斑点位置的距离，按照R 值定义计算 f 各斑点的Rf值。与标准样点比较，确认混合样各组分斑点 （斑点1，斑点2 ）的 归属。记录，并将色谱图描绘下来，附在报告中。 三、实验内容 用柱色谱分离甲基橙和亚甲基蓝 装柱 湿装法装柱，将中性氧化铝与95%乙醇洗脱剂混合，搅拌后倾入色谱柱， 用洗耳球轻敲柱管，使吸附剂均匀沉降到底部，打开旋塞，将柱内液面降到与 柱面相齐时，关闭旋塞。 加样 用滴管将适量甲基橙和亚甲基蓝的混合液均匀地加到柱顶上，慢慢打开旋 塞，调整液面和柱面相平，关好旋塞，加入适量溶剂，加入约2厘米干净石英砂。 洗脱与收集 先用95%乙醇洗脱出蓝色的亚甲基兰，然后用水洗脱出橙色的甲基橙，分别 用锥形瓶接收。 三、实验内容 用纸色谱法分离与鉴定氨基酸 点样 用铅笔在滤纸一端距底