【国自然】血管发育和稳态维持的遗传及表观遗传机制.docxVIP

项目名称： 血管发育和稳态坚持的遗传及表观遗传机制 首席科学家： 杨晓 中国人民解放军军事医学科学院 起止年限： 2012.1至2016.8 依托部分： 总后勤部卫生部 一、要害科学问题及研讨内容 要害科学问题 脊椎动物的血管发生和血管构成是一个高度保存的触及多种细胞特化和定向分解以及相互效果的杂乱进程。血管内皮细胞怎么经过遗传和表观遗传机制对细胞表里的调控信号做出准确的反响并与相邻的不同类型细胞相互效果，历经血管发生和血管构成逐步发育成具有精密杂乱等级结构的功用性血管网络并坚持其稳态；这些调控机制的反常和紊乱又怎么导致心脑血管疾病的发生是本项目重视的要害科学问题。详细包含： 1、血管发生的遗传和表观遗传机制：血管体系形状建成的分子机制；表观遗传润饰的改动（要点重视组蛋白的甲基化润饰以及基因组的甲基化润饰）是否能够在血管构成进程中起到调理效果。 2、血管内皮细胞特化和定向分解的分子根底：原始造血体系中成血管母细胞分解成血细胞和血管内皮细胞的谱系联系及其分子机理；定向造血体系中主动脉腹侧内皮细胞怎么坚持其细胞特异性或转化为造血干细胞的分子机理；冠脉内皮细胞特化的分子机制。 3、重要信号通路影响血管重塑的遗传和表观遗传机制：TGF-和VEGF信号通路及其调控的miRNA调理内皮细胞功用、内皮细胞-壁细胞相互效果、及其对血管重塑和稳态坚持的功用和机制。 4、血管损害后重塑的分子机制：血管损害及重塑进程中凋亡滑润肌细胞的炎症扩大效果及其机制；牵拉影响引起内皮细胞炎症分子的开释；血管损害及重塑进程中血管滑润肌细胞增生的分子机制和干涉办法。 首要研讨内容 1、血管发生是血管发育的前期事情，触及图式构成、内皮细胞命运决议和分解等发育生物学和细胞生物学根本科学问题。本项目拟运用斑马鱼作为方法生物，经过大规模诱变技能挑选血管发生反常的骤变体，寻觅血管及相关安排器官发育的重要调控因子与符号基因，然后深化研讨它们在血管发生进程中的功用。在血管发生的表观遗传学机制方面，经过表达谱测序来得到斑马鱼中特定时期或许存在的甲基化酶或去甲基化酶，克隆得到这些基因，经过体外组成mRNA后进行打针以验证这些基因在血管发生进程中的效果。经过构建表达甲基化酶或许去甲基化酶的转基因鱼，结合体外生化试验验证这些甲基化酶或许去甲基化酶在血管构成不隔阂期的生理功用。此外，经过转基因办法在血管内皮细胞中特异性表达绿色或赤色荧光蛋白（GFP或RFP），结合长期在体双光子或共聚集显微镜成像技能，实时记载和盯梢中脑内的一切血管的三维形状改动。然后，运用图画剖析、流体力学模型剖析、细胞生物学、分子生物学等手法，研讨脑血管网络发生和发育的微观规则和分子机制。 2、讨论血管内皮细胞特化和定向分解的分子根底。运用多种特异性符号血管体系的转基因鱼和大规模诱变技能挑选影响血管发生和造血体系的骤变体，经过共聚集显微镜进行实时调查并比较野生型与骤变体中血管发生和造血进程的差异，研讨血液血管母细胞分解成血管内皮细胞和血细胞的谱系联系及其调控网络。隔阂，结合内皮细胞特异性基因敲除技能，研讨主动脉腹侧内皮细胞定向分解为造血干细胞的分子调控机理。此外，寻觅高级哺乳动物小鼠的冠脉内皮细胞来历，运用Cre-LoxP技能提醒Notch信号通路调控冠脉发生以及内皮细胞生物学活性的分子机制，说明心外膜促进冠脉发生的重要生理功用和机制。 3、在重要信号通路影响血管重塑的遗传和表观遗传机制研讨方面，首要运用依据Cre-LoxP体系的小鼠安排特异性条件基因敲除技能，构建血管内皮细胞、血管滑润肌细胞、脑血管内皮细胞特异性基因敲除小鼠，深化研讨不同类型心血管细胞怎么对来自本身和环境的TGF-和VEGF信号做出准确反响，以及这种反响性反常怎么导致血管重塑反常以及心血管疾病的发生。隔阂挑选受TGF-调控的miRNA，并对这些miRNA调理内皮细胞功用、内皮-壁细胞相互效果、及其在血管重塑进程中的功用和机制进行深化的讨论。 4、归纳运用基因敲除小鼠和多种血管损害模型，深化研讨血管损害后重塑的分子机制。首要探究血管损害后滑润肌细胞凋亡的要害信号通路IGF-1R-SGK1的效果、研讨介导血管损害后凋亡滑润肌细胞的炎症扩大效果的要害分子机制、说明血管损害及重构进程中炎症细胞的来历、说明阻断COX-2来历的前列腺素对血管损害后内膜增生的维护效果及其分子机制。隔阂清晰深海鱼油EPA/DHA是否协同COX通路干涉血管重塑、深海鱼油EPA能否调理动脉损害后血管重塑、以及深海鱼油EPA与阿斯匹林协同调理血管损害后重塑以及抗血栓效果和机制。 二、预期方针 全体方针： 本项目瞄准血管发育研讨范畴的前沿，整合国内优异研讨团队，体系深化地展开血管发生和血管构成的遗传和表观遗传机制研讨。本项意图全体方针如下：说明血管发生和血管构成进程中新的遗传和表观遗传机制