猪源益生菌对宿主肠道病毒的抗病毒作用研究.docxVIP

猪源益生菌对宿主肠道病毒的抗病毒作用研究 益生菌的应用已持续数十年 , 虽然其益生作用机理尚不清楚 , 但在临床上对 消化道疾病的显著疗效已经得到充分的证实 , 对机体免疫功能的保护和增强作用 愈加受到关注。一般认为益生菌在临床治疗肠道感染性腹泻的分子和细胞机制主 要涉及三个方面 :(1) 益生菌可产生抗菌物质并竞争性与病原性微生物黏附于肠 上皮细胞来阻止病原体在肠道的黏附和定植 ;(2) 益生菌可提高病毒感染时肠上 皮细胞的存活率和保护肠道的正常生理结构并刺激保护性免疫反应来调节机体 免疫 ;(3) 益生菌可通过调节肠道微生态平衡来保护和抵御病原微生物的侵袭。 本研究主要从分子水平、 细胞水平以及动物体内试验三个方面阐述猪肠道益 生乳酸菌对传染性胃肠炎病毒 (TGEV)和猪流行性腹泻病毒 (PEDV)的抑制作用和 免疫调节作用 , 获得了以下结果 :(1) 分离筛选出在猪睾丸细胞 (ST 细胞 ) 上对 TGEV具有抑制作用的 3 株猪源肠道益生菌 Y091231、Y091221和 Y224031,经 16S rDNA鉴定分别为唾液乳杆菌 (Lactobacillus saliarius), 约氏乳杆菌 (Lactobacillus johnsonii) 和粪肠球菌 (Enterococcus faecalis) 。 (2) 筛选菌 对感染 TGEV的 ST 细胞具有保护作用。 3 株益生菌及其代谢产物接入顺序不同 , 对病毒的抑制率也不同 ,Y091231 菌 悬液在预先接入的情况下可以达到最大抑制率 (65%), 而 Y091221和 Y224031则在 与病毒共同接入时表现出较高的抑制率。 通过半定量 RT-PCR检测结果可知 ,3 株 益生菌及其代谢产物均可以降低 TGEV在 ST细胞内的增殖 ,Y091231 菌悬液在各 处理组中具有稳定的较高的病毒抑制力。 益生菌在体外抗 TGEV作用中 , 可以通过上调 IL-8 和 IL-12 、下调 IL-4 和 INF- α这 4 种细胞因子在细胞培养上清中的表达量 , 从而刺激细胞免疫 , 起到抵御病 毒入侵的作用。 (3) 分离鉴定 PEDV-WN株, 构建动物模型。 从临床病料中分离得到 PEDV,然后对毒株进行 RT-PCR鉴定及 M、S 基因序列 分析 , 与 CV777株对比分析 ,PEDV-WN株的 M基因具有高度保守性 , 可以作为检测 PEDV的靶基因 ;S 基因变异较大 ,S 蛋白内分的核心和表位 (CEO,499-638aa) 共有 9 个氨基酸位点发生了突变。将 PEDV-WN株回归试验动物 , 成功构建了典型 PEDV 感染动物模型。 (4) 唾液乳杆菌 (Lactobacillus saliarius) 对 PEDV-WN株具有抑制作用 , 对 病毒感染的仔猪具有保护作用。 该菌株的预防性干预和治疗性干预均能提高仔猪 存活率 , 提高仔猪生长性能 , 减轻病毒对肠道组织的病理损伤 , 并能降低病毒在机 体内的增殖。 益生菌可以调节机体 IL-4 、IL-8 、IL-12 、INF- α4 种细胞因子和 MHCⅡ的 表达量 , 从而刺激机体的细胞免疫和体液免疫 , 起到抗病毒的作用。 (5)PEDV 感染 严重破坏了正常的肠道菌群结构和菌种丰度 , 唾液乳杆菌的干预可以保护肠道微 生态保持健康的平衡状态 , 并能迅速修复失调的肠道微生态。 通过对粪便菌群的 16S rDNA高通量测序的方法 , 对 PEDV感染和益生菌干预 的不同试验组的肠道菌群的变化规律和差异性进行了对比分析。