猪不同生长阶段耐黏菌素大肠埃希菌的动态变化研究.docxVIP

猪不同生长阶段耐黏菌素大肠埃希菌的动态变化研究 多黏菌素在 20 世纪 60 年代被广泛用于治疗革兰氏阴性菌感染 , 因多黏菌素 类药物抗菌谱窄且具有较严重的肾毒性和神经毒性等不良反应 , 在 20 世纪 80 年 , 被抗菌谱更广、不良反应更小的抗菌药物如β - 内酰胺类抗生素所替代 , 在临床上逐渐被限制使用 , 但是近几年随着耐碳青霉烯类抗生素菌株的出现 , 多黏菌素类抗生素作为治疗多重耐药菌感染 , 又被重新应用于临床 , 使用频率也趋增加 , 并被视为临床抗感染的最后选择。 2015 年刘建华首次提出了肠杆菌科质粒介导 的 mcr-1 耐黏菌素机制 , 相关研究证实 mcr-1 基因不仅可以从动物身上分离得到 , 从人和肉类食物中也可分离得到 , 且分离出的耐黏菌素的菌株主要为大肠埃希菌。 为比较分析获得我国不同地区猪不同生长阶段粪便中携带耐黏菌素大肠埃 希菌的本地数据 , 阐明黏菌素耐药基因扩散和水平传播机制 , 本研究采集来自吉 林省长春市、吉林省梅河口市、甘肃省张掖市、甘肃省庆阳市四个地区共 563 份猪粪便样品 , 通过黏菌素抗性选择性培养基培养、 PCR方法鉴定耐黏菌素大肠 埃希菌 ; 使用 PCR的方法筛选黏菌素耐药基因 ; 使用多重 PCR的方法对耐黏菌素大 肠埃希菌进行系统进化分群、 质粒分型实验 ; 通过最小抑菌浓度 (MIC) 实验确定耐 黏菌素大肠埃希菌分离株对黏菌素的耐药值 ; 通过接合转移实验来确定耐药基因 扩散、水平传播机制。结果显示 : 从来自吉林省长春市、吉林省梅河口市、甘肃 省张掖市、甘肃省庆阳市四个地区共 563 份猪粪便样品分离鉴定出 273 株耐黏菌 素大肠埃希菌 , 总分离率为 48.5%。 针对 273 株分离株检测黏菌素耐药基因 mcr-1,mcr-1 耐药基因的检出率为 100%。对 273 株耐黏菌素大肠埃希菌分离株进行了系统进化分群 , 结果显示除庆 阳市育肥阶段外 , 长春市、梅河口市和张掖市三个地区在育成、育肥阶段均以 A 群为主要优势群 ,B1 群次之。 四个不同地区分离株在哺乳阶段的系统进化分群结果存在稍微差别。 对 273 株耐黏菌素大肠埃希菌分离株进行质粒复制子基因分型。 大肠埃希菌常见质粒复制子基因分型检测 , 结果显示共检测到 11 种质粒型 , 不同地区的分离株均以 IncFIB 型质粒 (41.8%,114/273) 为主 , 其次为 IncY 型质粒 (14.3%,39/273),IncFIC 型质粒 (8.8%,24/273) 等; 可携带 mcr-1 基因质粒复制子 基因分型检测 , 结果显示不同地区的分离株主要为 X4 型质粒 (38.1%,104/273), 其次为 I2 型质粒 (26.4%,72/273) 等。挑选四个不同地区不同生长阶段的 172 株 样品分离株进行接合转移实验 , 结果发现有 123 株接合转移成功 , 接合转移发生 率为 71.5%(123/172), 且接合子均携带 mcr-1 基因 , 说明 mcr-1 基因位于接合性 质粒上 , 并且可以伴随着质粒发生转移、传播和扩散。 针对挑选的四个不同地区不同生长阶段的 172 株样品分离株及接合转移成 功获得的 123 株接合子做了最小抑菌浓度 (MIC) 实验 , 结果显示不同地区分离株 对黏菌素的 MIC 值主要为 8μg/mL(83.7%144/172), 其次为 4μ g/mL(14.5%25/172) 、16μg/mL(1.8%3/172) 。在发生水平转移后大部分接合子对 黏菌素的 MIC值保持一致 (86.2%106/123), 部分接合子发生升高 (7.3%9/123) 或 降低 (6.5%8/123) 的变化。 本研究通过对不同地区猪不同生长阶段耐黏菌素大肠埃希菌的监测所获得 的数据 , 初步掌握了猪不同生长阶段耐黏菌素大肠埃希菌的动态变化 , 为 mcr-1 耐黏菌素机制的研究提供参考数据。