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物理及化学处理脱除砂梨潜隐病毒研究 苹果褪绿叶斑病毒 (Apple chlortotic leaf spot virus ，ACLSV)、苹果茎 沟病毒 (Apple stem grooving virus ，ASGV)和苹果茎痘病毒 (Apple stem pitting virus ，ASPV)是梨树上发生普遍的 3 种重要的潜隐病毒， 在我国梨产区主要栽培 品种上的带毒株率高达 86.3 ％以上 ( 王国平等， 1994) 。使用无病毒种苗是减轻 这些病毒病危害的最有效措施 ( 王国平等， 2002) 。 为建立有效的病毒脱除技术， 本研究以同时带有这 3 种病毒的砂梨离体植株 为材料，比较分析了不同物理和化学处理技术与茎尖培养相结合的脱病毒效果， 研究结果如下： 1 ．比较分析了 3 种不同热处理方法对‘丰水’梨离体植株 生长的影响， 结果表明， 37℃恒温热处理对植株的生长影响最大， 导致大部分植 株死亡及繁殖系数的明显降低， 并且对 ‘丰水’ 梨离体植株的生长产生明显的抑 制作用；32℃／ 38℃变温处理对植株生长的影响较小， 处理中后期的繁殖系数和 株高与未处理植株接近或高于未处理植株； 34℃／ 42℃处理对植株生长的影响介 于前两种方法之间。 2 ．采用 PAS-ELISA和斑点杂交技术对脱病毒处理后获 得的梨再生植株带病毒状况进行了评价，结果显示， 3 种热处理方法对梨离体植 株病毒含量的影响呈相同的趋势， 即在处理时间相同时， 所取茎尖愈小， 再生植 株病毒含量愈低； 所取茎尖大小相同时， 处理时间越愈长， 再生植株病毒含量愈 低。 不同热处理方法的脱病毒效果存在一定的差异， 37℃恒温热处理至 35d 后取 1mm茎尖基本可以脱除 ACLSV、ASGV和 ASPV； 32℃／ 38℃变温处理至 50d 后取 1mm茎尖仍不能脱除这 3 种病毒；通过提高变温处理温度至 34℃／ 42℃和切取较 小的茎尖 (0.5mm和 1mm)，可以显著提高脱病毒效率，处理 50d 后取 0.5mm茎尖 即可完全脱除 3 种病毒。此外，发现在砂梨中 ACLSV相对较易脱除， 在同样条件 下所需热处理周期较 ASPV和 ASGV可缩短 5d 左右。 3 ．采用所建立的 34℃／ 42℃变温处理方法，对除‘丰水’梨外的另 3 个砂梨品种进行了处理， 发现不同品种的热敏感性存在差异， 但所有这些品种在 该条件下处理 50d-60d 后，从存活植株上取 0.5mm茎尖再培养获得了脱病毒率 100％的效果。 4 ．比较分析了病毒醚不同工作浓度、 处理时间及不同处理方 法对‘丰水’梨离体植株生长和病毒脱除效果的影响，结果表明，在 MS培养基 中病毒醚含量低于 25μ g／ ml 时，或梨离体植株用含 25μg／ml 病毒醚的溶液浸 1d-3d 后继续在含病毒醚的 MS培养基中生长时，仅出现轻微的药害，药害的程度随处理时间的延长而加重。 对病毒醚处理后取 1cm茎尖培养再生植株的病毒检测结果表明， 在病毒醚浓度为 50μg／ml 时，可脱除以上 3 种病毒。在含 25μ g／ ml 病毒醚 MS培养基中培养 40d-50d 后，耿 1mm茎尖可脱除 3 种病毒。 在含病毒醚的 MS培养基中培养前用病毒醚浸泡。