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玉米转录因子 ZmPTF1基因的功能分析 bHLH转录因子家族在高等植物不同组织中广泛存在并且参与众多代谢过程 的调控。 ZmPTF1是 bHLH转录因子家族的成员 , 有研究表明 ZmPTF1转录因子调控 碳代谢和根的生长增加了玉米对低磷的耐性 , 对低氮、干旱和高盐等逆境也有明 显应答。 并且过表达 ZmPTF1导致玉米根部大量基因表达发生变化。这些表达发生差 异的基因涉及多个代谢途径 , 如 PAMPs诱发的抗病途径、次生代谢途径、激素代 谢及信号转导途径、碳水化合物代谢途径等。 本实验以前人从玉米 A318 中克隆的一个 bHLH家族转录因子 ZmPTF1基因为 研究对象 , 对其启动子的顺式作用元件进行了分析。并构建植物表达载 PCAMBIA3301-ZmPTF1,通过农杆菌介导将其转入烟草 , 研究基因的生物学功能。 此外还对 ZmPTF1蛋白的靶基因进行了初步筛选主要研究结果如下： 1. 应用 生物信息学工具对 ZmPTF1基因的启动子的顺式作用元件及其预测蛋白蛋白质基 本理化性质进行分析。 结果表明该区域存在多个激素应答元件、 多种生物和非生 物胁迫应答元件、光反应应答相关元件及一些基础代谢相关元件。 其蛋白质由 481 个氨基酸残基构成 , 为疏水性蛋白。 2. 将已构建好的原核表 达载体 PET-32a-ZmPTFl转入原核表达菌 BL21 中,IPTG 诱导表达 , 得到大约 52.5KDa 的 ZmPTF1/His融合蛋白。 3. 运用 Pull-down 方法以玉米总 DNA为目标 , 以原核表达出的 ZmPTF1/His 融合蛋白为诱饵筛选能与其结合的靶基因片段 , 得到 15 个不同的序列。经测序比 对分析 , 筛选出 10 个可能的 ZmPTF1靶片段。 候选靶基因主要涉及了激素合成信号转导 , 生物和非生物胁迫应答 , 生长发 育调控等方面。 4. 构建植物表达载体 PCAMBIA3301-ZmPTF1,并通过农杆菌介导法 将表达载体转入烟草。 PCR鉴定得到 17 株转基因阳性烟草。 对生长正常的 T1 代阳性转基因烟草进 southern 杂交分析及 RT-PCR检测 , 结果表明外源 ZmPTF1已经整合进了烟草基因组中并且能正常转录并遗传。 5.ZmPTF1基因生物学功能研究结果表明：转基因烟草种子的发芽率、发芽势及萌发种子α - 淀粉酶活性显着增高 , 对 ABA抑制萌发和生长的作用不如野生型敏感。 ZmPTF1基因在烟草中表达能够促进烟草种子提前解除休眠进入发芽阶段 , 减轻 ABA对烟草种子休眠的诱导和幼苗生长的抑制。 提高烟草种子发芽势和发芽率。 ZmPTF1可能广泛参与玉米激素转导、组织分化调控、光信号传递及胁迫应答等生物学过程。