细胞培养从头学起.docVIP

常用设备 —?准备室的设备： 单蒸憎水蒸憎器、双蒸馆水蒸馆器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储 品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH 计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液时搅拌溶液）。 二.培养室的设备： 液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-801C ）、 空调.二氧化碳缸瓶.边台（书写实验记录）。必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、 超净工作台、倒置显微镜.C02孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、冰箱（放 置serum和培养用液）。 无菌操作 无菌室的灭菌： 1?定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地.擦桌子、超净工作台等，然后用3%。来 苏尔或者新洁尔灭或者0. 5%过氧乙酸擦拭。 CO2孵箱（培养箱）灭菌：先用3%。新洁尔灭擦拭，然后用75%酒精擦拭或者0.5%过氧乙 酸，再用紫外灯照射 ：3.实验前灭菌：打幵紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟 实验后灭菌：用75%酒精（3%。新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。 实验人员的无菌准备： 肥皂洗手。 穿好隔离衣、带好隔离帽、□罩、放好拖鞋 用75%酒精棉球擦净双手。 无菌操作的演示： 1?凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白购的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的 外表面 靠近酒精灯火焰操作。 器im使用前必须过火灭菌 继续使用的器DB （如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火° 各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。 吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。 器械的淸洗和消毒 玻璃器械洗消： （1）新的玻璃器hd的洗消： 自来水刷洗，除去灰尘。 烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5%稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砒等物。 刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。 泡酸、清洗：用清洁液（重辂酸钾120g:浓硫酸200ml:蒸馆水1000ml）浸泡12小时，然 后从酸缸内捞出器HD用自来水冲洗15次，最后蒸徭水冲洗3-5次和用双蒸水过3次。 烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。 高压消毒：包装好的器tin装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时, 关闭安全阀，当指针指向15磅时，维持20-30分神。 高压消毒后烘干 （2） 旧的玻璃器血的洗消： 刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过来苏尔溶液（洗 涤剂）的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。 泡酸、清洗：烘干后泡入清洁液（酸液），12小时后从酸缸内捞出器血立即用自来水冲洗 （避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗），再用蒸谓水冲洗3次。 烘干.包装：洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸（油光纸）等包装，以便于消毒储存及防止 灰尘和再次被污染。 高压消毒：包装好的器nn装入高压锅内，盖好盖子，打开开关和安全阀，随着温度的上升安 全阀冒出蒸气，当蒸气成直线冒出3-5分钟后，关闭安全阀，气压表指数随之上升，当指针指向 15磅时，调节电幵关维持20-30分钟即可。（玻璃培养瓶消毒前可将胶帽轻轻盖上） 烘干备用：因为高压消毒后器皿会被蒸气打湿，所以要放入烤箱内烘干备用。金属器械洗消: 金属器皿不能泡酸，洗消时可先用洗涤剂刷洗，后用自来水冲干净，然后用75%酒精擦拭，再 用自来水，然后用蒸谓水冲洗，再烘干或空气中晾干。放入铝制盒内包装好在高压锅内15磅高 压（30分钟）消毒，再烘干备用。 （3） 橡胶和塑料： 橡胶和制品通常处理方法是：先用洗涤剂洗刷干净，再分别用自来水和蒸懾水冲干净，再用烤 箱烘干，然后根据不同品质进行如下的处理程序： 针式滤器帽不能泡酸液，用NaOH泡6-12小时，或者煮沸20分钟，在包装之前要装好滤膜两 张，安装滤膜时注意光面朝上（凹向上），然后将螺旋稍微拧松一些，放入铝盒中在高压锅内15 磅30分钟消毒，再烘干备用。注意在超净台内取出使用时应该立即将螺旋旋紧。 胶塞烘干后用2%氢氧化钠溶液煮沸3（）分钟（用过的胶塞只要用沸水处理30分钟），自 来水洗净，烘干。然后再泡入盐酸液3（）分钟，再用自来水，蒸谓水，三蒸水洗净，烘干。最后 装入铝盒内高压消毒，烘干备用。 胶帽，离心管帽烘干后只能在2%氢氧化钠溶液中浸泡6-12小时（切记时间不能过长）， 自来水洗净，烘干。然后再泡入盐酸液30分钟，再用自来水，蒸徭水，三蒸水洗净，烘干。最 后装入铝盒内高压消毒，烘干备用。 胶头可用75%酒精浸泡5分钟，然后紫外照射后使用即可。 塑料培养瓶，培养板，冻存管： 其他消毒方法：有的物品既不能干燥消毒，又不能蒸气消毒，可用7