实验三细菌形态结构观察及革兰染色全解.pptVIP

详细讲解染色原理。 详细讲解细菌涂片标本的制备及革兰染色法的步骤。 强调无菌操作。 适时启发学生思考具体问题。如细菌的涂片，菌液应挑多少?涂抹后的菌膜应是多大?多少厚度的最好? 强调染色步骤中，酒精脱色的时间要严格掌握 强调注意观察颜色的不同，同时注意形态、排列。 强调操作时的注意事项。 介绍染色意义。 用一个烧杯盛满一杯水，放入一只筷子，让学生观察效果。这样做，学生就容易理解使用油镜的原理，并牢记不滴油是看不清细菌形态的 。 复习显微镜的基本结构 详细讲解显微镜油镜的使用和保护法 归纳总结学生在操作时的注意事项。 参考资料： 1、刘荣臻主编《病原生物与免疫学》人民卫生出版社 2、陈育民主编《病原生物学与免疫学》 第四军医大学出版社 3、山长武主编《医学微生物与免疫学学实验指导》人民卫生出版社 介绍本次课实验报告书写方法，组织学生书写实验报告 将学生分组，操作。巡视，指导学生正确操作、观察，解答学生疑难 。 教学反思： 1、按教学计划、完成了本次课教学任务和教学目标。 2、学生感觉教学效果良好，基本可以掌握。 3、做好示教 让学生知道如何操作，操作中要注意的问题。 4、细菌的革兰染色是微生物实验教学的一项重要内容 5、无论示教还是带教，都应认真地用自己的言行把无菌观念渗透给学生以达到强化无菌观念的目的 教师要不断巡视，及时发现问题并予以纠正。如革兰染色时，学生对教师示教过的无菌操作如接种环的灭菌、试管口的灭菌掌握较好，但有些学生在干燥时为节约时间，用嘴吹；沾有细菌的吸水纸随意丢掉等。在总结时，我们把这些问题提出来让学生讨论，使他们真正理解无菌操作要体现在实验的每一个细节上。 6、调动学生学习的积极性和主动性 多数学生只是机械的把实验过程作一遍，被动地接受式学习,要设计一些问题如2号菌大肠杆菌染成半红半紫色可能什么原因引起的，以调动学生学习的积极性和主动性,重视学生思维能力的培养。 7、做好预实验工作 为了圆满达到实验预期的结果 ，教师要培养出典型的细菌培养物，配制好所需的各种细菌染料，要做好革兰染色预试验工作。 8、实验结束时要总结，对普遍存在的问题要纠正。要允许和鼓励学生在实验失败后重做。 大部分学生染色结果很好，少部分学生染的不理想，要帮他们找出失败的原因，鼓励他们重做。 2021/2/6 * （二）、 G染色步骤与方法 1、涂片制备 涂片 干燥 固定 2、染色 初染（结晶紫） 1min 媒染（卢戈氏碘 液） 1min 脱色（95%乙醇） 30s 复染（石碳酸复红） 30s 吸水纸吸干 3、镜检（油镜下观察） 每次染色后都要进行冲洗 时间:一、一、半、半 2021/2/6 * 葡萄球菌 大肠杆菌 （三）、G染色结果 革兰氏阳性 革兰氏阴性 2021/2/6 * （四）、革兰染色注意事项 涂片要均匀,不可太厚 干燥时切勿在火焰上直烤 染色时脱色最关键 细流水冲洗,不要直冲涂膜 涂片上积水不能太多,以免稀释染液 2021/2/6 * （五）、革兰染色的意义 1、鉴别细菌 通过染色将细菌分为G+、G-两大类细菌 2、研究与致病性的关系 G+菌致病一般为外毒素 G-菌致病一般为内毒素 3、指导临床用药 G+菌对青霉素、红霉素、头孢菌素敏感 G-菌对上述药物不敏感,对链霉素、氯霉素、庆大霉素、卡那霉素等敏感 2021/2/6 * （一）油镜工作原理 油镜的透镜非常小。在不加油的情况下,由于空气和玻璃对光线的折射率不同,因此光线透过载玻片经过空气时发生散射,很少能够进入油镜,造成物像不清。香柏油（n=1.515）的折光率与玻璃（n=1.52）相近,由于光线透入时不会因折射而减弱,因此视野明亮,物像清晰。 三、显微镜油镜的使用 2021/2/6 * 目镜 物镜 载物台 集光器 光源 镜臂 粗螺旋 细螺旋 2021/2/6 * （二）油镜使用方法 1．对光 接通电源,打开显微镜上的电源开关,内置光源灯亮,并可调节亮度。使用油镜时,应将灯光调至最亮,聚光器升至最高,光栅完全打开。 2．标本加油 在细菌染色片的菌膜上滴加1滴香柏油,注意勿使载物台倾斜,以免镜油流淌。 3．识别并转换油镜头 油镜有三种标志:①放大倍数×100;②镜头下缘有一圈白线;③英文标识“oil”。找到油镜,旋转物镜转换器（勿用手直接掰动镜头）使油镜头转至载物台中央。 4．调焦、观察标本 从侧面观察并缓慢转动粗调螺旋,使载物台上升至油镜头浸入油中并几乎与玻片