微生物工程(药科大学生物工程课件).ppt

2021/2/6 * 诱变育种工作中几个应注意的问题: A 选择好出发菌株 B 复合诱变因素的使用 C 剂量选择 D 变异菌株的筛选 E 高产菌株的获得需要筛选条件的配合 2021/2/6 * 原生质体（protoplast):动植物和微生物细胞去除细胞壁以后的一种细胞结构。 三条标准（1958年Brenner): 没有细胞壁 失去细胞刚性,成球形 对渗透压敏感脆弱 三、原生质体融合 2021/2/6 * 原生质体融合 用脱壁酶处理将微生物细胞壁除去,制成原生质体,再用聚乙二醇（PEG）促进原生质体发生融合,从而获得融合子。 2021/2/6 * （五）融合子的选择 （四）原生质体的再生 （三）原生质体的融合 （二）原生质体的制备 （一）标记菌株的筛选 2021/2/6 * （二）原生质体的制备 6.渗透压稳定剂 5.酶解时间 4.酶解温度 3.酶浓度 2.菌体的培养时间 1.菌体的预处理 2021/2/6 * （三）原生质体的融合 原生体在诱融剂或正弦电场作用下凝集,彼此靠近, 两个相邻原生质体之间的质膜相互融合,两亲本原生质体质膜上的受体、糖蛋白。糖脂等成分也在融合后的质膜上重新分布,细胞质发生融合,细胞核发生融合,形成单核融合细胞 2021/2/6 * PEG诱导融合的原理 PEG是带负电的高分子化合物,在原生质体融合中起到一种桥梁作用,可以使原生质体凝集,洗脱过程中PEG可被洗掉,导致质膜表面电荷重排。粘连的质膜大面积紧密相连,电荷的重排导致一个原生质体的负性电荷部位和另一原生质体的正性电荷部位相连而导致融合。 2021/2/6 * PEG诱导融合 1.融合频率高 2.可重复性强 3.诱发融合无特异性 4.毒性较低 2021/2/6 * 电融合技术 利用改变电场诱导原生质体彼此相连成串,施以瞬间强脉冲电压促使质膜发生可逆性电击穿。达到原生质体融合的方法。 特点:效率高 对原生质体伤害性小 对融合细胞数易于控制 2021/2/6 * 即细胞重建细胞壁,恢复细胞完整形态并能正常生长分裂。 测定原生质体再生率（必须进行） 原生质体再生率＝（再生平板均数-低渗处理剩余菌数）/原生质体总数 （四）原生质体的再生 2021/2/6 * 靠选择性遗传标记进行选择,注意区分杂核二倍体（真融合）和异核体假融合。 （五）融合子的选择 2021/2/6 * 第四节 代谢工程 一、代谢工程的概念 是一门利用分子生物学原理系统分析细胞代谢网络、并通过DNA重组技术合理设计细胞代谢途径及遗传修饰、进而完成细胞特性改造的应用性学科。 2021/2/6 * 二、代谢网络理论 代谢通量分析（metabolic flux analysis,MFA) 2021/2/6 * 研究对象:代谢网络; 目标:修饰代谢过程——将代谢物质流导入目的代谢产物的载流途径,以获得产物的最大转化率; 主要依据:对代谢节点的判断。 2021/2/6 * 三、代谢工程的研究方法 （一）代谢通量分析 （二）代谢控制的动力学分析 2021/2/6 * 第五节 微生物工程的应用与发展前景 一、微生物工程产品的主要类型 产品 2 5 3 4 1 微生物菌体药物 微生物次级代谢产物 微生物 转化药物 生物活性大分子药物 微生物初级代谢产物 2021/2/6 * 二、微生物工程中医药工业中的应用 （一）抗生素类 （五）酶与辅酶类 （二）维生素类 （六）酶抑制剂类 （三）氨基酸类 （七）免疫调节剂类 （四）核苷酸类 （八）受体拮抗剂类 返回目录 2021/2/6 * 厌氧发酵:适用于厌氧或兼性厌氧微生物的发酵,如丙酮丁醇发酵、酵母菌的酒精发酵、乳酸发酵等 好氧发酵:适用于好氧微生物的发酵,如链霉素、谷氨酸、柠檬酸等的发酵 根据是否需要氧气可分为厌氧发酵和好氧发酵 2021/2/6 * 2021/2/6 * （一）分批培养 指在发酵过程中,除了不断进行通气（好氧发酵）和为调节发酵液的 pH 而加入酸碱溶液外,与外界没有其它物料交换的一种发酵方式。培养基的量一次性加入,产品一次性收获,是目前广泛采用的一种发酵方式。 根据投料方式的不同可分为分批培养、补料分批培养、半连续培养和连续培养。 2021/2/6 * 分批培养中微生物的生长 迟滞期 对数生长期 稳 定 期 死亡期 2021/2/6 * 优点 操作简单,周期短,染菌机会少,生产过程和产品质量容易掌握 缺点 产率低,不适于测定动力学数据 20