在线二维液相色谱法快速测定桂枝茯苓胶囊中芍药苷、丹皮酚、苦杏仁苷和肉桂酸的含量.docxVIP

在线二维液相色谱法快速测定桂枝茯苓胶囊中芍药 苷、丹皮酚、苦杏仁苷和肉桂酸的含量 高效液相色谱已成为中药复杂体系研究的重要技术， 随着新 型色谱柱填料和键合技术的发展， 为中药中各类成分的分离提供 了多种选择，然而中药的复杂性已远远超出了人们的设想， Davis 等[1] 曾经指出用一维分离方法对含有 100 个随机组分的样品进 行分离，完全分离 82个组分，至少需要 400 万的理论板数，且 当色谱峰的数量超过峰容量的 37%时，系统的分离度会大大降低， 所以在现有技术条件下， 期望如此高的柱效和峰容量是不切实际 的。多维液相色谱分离是液相色谱发展的一个重要方向， 它是将 多种不同分离机制的色谱体系进行联用， 增加了色谱系统的分离 能力，扩大了分离空间，提高了系统的峰容量，可以满足复杂样 品的分离要求。在多维色谱分离手段中，二维分离最为常见。二 维色谱根据一维组分是否直接进入到第二维进行分离可分为离 线[2-4] 和在线 [5-6]2 类，其中在线方法具有自动化程度高、避 免人为误差及加快样品分析效率等优点， 二维液相色谱分离技术 已被越来越多的应用到中药的研究中 [7-9] 。 桂枝茯苓胶囊系汉代张仲景 《金匮要略》 古方桂枝茯苓丸的 改进剂型，经现代制造工艺精制而成为纯中药制剂，由桂枝、牡 丹皮、桃仁、赤芍和茯苓组成。在 2010 年版《中国药典》中收 载的桂枝茯苓胶囊含量测定项下分别采用 3 种高效液相色谱法 测定丹皮酚、 芍药苷和苦杏仁苷的含量 [10] ，不仅实际样品的分 析效率较低， 且缺乏来自桂枝中的指标性成分。 本文利用双梯度 高效液相系统（ dual gradient liquid chromatography ， DGLC） 在线二维色谱分离技术，样品提取后，溶液直接进样分析，并同 时测定了肉桂酸的含量， 含量测定结果与原方法基本一致， 且样 品分析效率大大提升，可用于桂枝茯苓胶囊的质量分析。 材料 双三元液相色谱RS系统（美国赛默飞世尔公司），配置 6 通道真空脱气机SRD36O0双梯度分析型色谱泵 DGP3600RS自 动进样器 WPS3000TSL柱温箱TCC-3000 （配有1个六通阀和1 个十通阀），二极管阵列检测器 DAD3000RS变色龙色谱管理软 件 Chromeleon 6.8 SR11; Acclaim PAH （4.6 mnh 150 mm 3 卩 m, 美国赛默飞世尔公司， 批号063191） ; Acclaim C18色谱柱（3.0 mm 150 mm 3 a m,美国赛默飞世尔公司，批号 063691 ）。 磷酸二氢钾（分析纯，国药集团化学试剂 XX公司）；乙腈、 甲醇（色谱级，Fisher公司）；去离子水（18.2 MQ , Millipore ）; 丹皮酚对照品（ paeonol ， 纯度 96.8%，中国食品药品检定研究 院，批号 110821-201112 ）;芍药苷（ peniflorin ，纯度 98%， 上海安谱，STA;苦杏仁苷（amygdaloside，纯度 99% 上海安谱，STA;肉桂酸 （cinnamic acid ,纯度 99% 上海安谱，STA。桂枝茯苓胶囊（江苏康缘药业 XX 公司，产品批号 110625， 110626， 110730）。 方法和结果 色谱条件 一维分析泵的流动相 A 为乙腈，流动相 B 为 0.08%磷酸+0.08%三乙胺， Acclaim 120 C18 为一维分析柱，流 速为 0.5 mL?min-1,梯度洗脱，0?10 min, 15%A 10?25 min, 15%^75%A 25?30 min, 75%?85%A 30?33 min, 85%A 33? 35 min , 85%?15%A二维分析泵的流动相 A为乙腈，流动相 B 为 20 mmol, pH 3.0 的磷酸二氢钾，Acclaim PA II C18 为二维分 析柱,梯度洗脱程序, 0? 5 min , 5%A, 5? 15 min , 5%? 40%A, 15?15.2 min , 40%?5%A, 15.2?20 min , 5%A, 20?30 min , 5%?70%A 30?35 min, 70%A 流速 0.8 mL?min-1,柱温 35 C, 检测波长 0? 10 min，230 nm，10? 15 min，218 nm，15? 35 min， 275 nm,进样量 5 L。 对照品溶液的制备 分别精密称取肉桂酸、芍药苷、苦 杏仁苷和丹皮酚对照品适量，按照 2010 年版《中国药典》桂枝 茯苓胶囊项下对照品溶液制备方法， 制得各对照品质量浓度分别 为 0.63，1.11 ，0.66，