前列腺癌方面免疫组化基础知识.ppt

2021/3/13 * （12）PBS漂洗（3次×2min）,此处不需分别漂洗,因所有切片均系同一酶标抗体孵育。 （13）未固定或固定较弱的冰冻切片,此处可轻微固定。首先将切片从PBS移至TBS中3～5min,去除PBS,以防其中的磷酸与后面使用的固定液中的CaCl2形成磷酸钙而沉淀后,然后用Baker氏固定液固定5min（室温）此时轻微固定,既不影响抗原抗体结合,又较有利于保存第一抗体孵育前的组织抗原,尤其适用于单克隆抗体的ICC染色。 2021/3/13 * （14）呈色:HRP标记抗体的呈色液为0.01%～0.1%H2O2 0.01%～0.05% DAB 0.05～0.1mol/L Tris –HCl(pH7.4)。切片经PBS或Tris-HCl液漂洗后,置上述呈色液内10～15min（室温、暗处）,亦可镜下控制显色速度。终产物为棕褐色沉淀。用于电镜观察的标本,呈色3～5min即可,防止DAB终产物向周围扩散,影响超微结构定位。另外,显色液应于用前新鲜配制,避免DAB本身氧化变质。新配制的DAB为无色透明液体。若DAB液已氧化变为紫红色,应换新药重新配制。 （15）将切片置流水中（仅光镜观察）或PBS（电镜标本）内,终止呈色反应。 （16）未固定的冰冻切片,可用1%戊二醛-PBS液加强固定5～10min（室温）,流水冲洗。 2021/3/13 * 17）细胞核轻度染色,以甲基绿和苏木精为常用。前者细胞核呈绿色,与HRP/ALP等终产物对比度尤佳,但不适于微波照射的标本。苏木精是组织学、病理学研究中普遍应用的核染色方法,与HRP、ALP的终产物对比度比较好。 （18）DAB呈色的标本,可以系列酒精脱水、Hemo-De透明、DPX封固。其它物质呈色的标本,在有机溶剂中沉淀物易溶解,褪色,所以用水溶性封固剂如明胶甘油等封固,次日,于盖玻片周围涂少许女士用指甲油,可使切片保存时间更长。 （19）镜检、观察记录同一般形态学研究。 （20）免疫电镜用标本,经OSO4后固定,按电镜标本要求处理（参见本书第七章　）。亦可OSO4固定,喷碳（Carbon Coating）,利用扫描电镜观察抗原的存在部位。 2021/3/13 * 免疫组化的试剂准备 最重要的是选择好一抗、二抗或者还有三抗,注意抗体的特异性、效价和交叉反应,最好用单抗。 其他常用试剂有: 1、0.01M(pH7.4)的磷酸盐缓冲生理盐水（PBS）,稀释抗体和洗片子用; 2、清洁液、纯水,洗玻片用 3、多聚赖氨酸处理载玻片,防止脱片 4、固定液:4%多聚甲醛或冷丙酮等; 5、15%~30%蔗糖,组织脱水用; 2021/3/13 * 6、梯度酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋,或者OCT包埋做冰冻切片; 7、抗原修复液:枸橼酸缓冲液（pH6.0）; 8、活化剂:EDTA或者Triton X-100; 9、1%~10%牛血清清蛋白（BSA）封闭液; 10、H2O2,灭活内源性过氧化物酶; 11、显色液:根据你做的酶来选择,如果是HRP就用DAB,如果是AKP,就用NBT/BCIP,免疫荧光则不需要; 12、50%缓冲甘油封片液。 2021/3/13 * 免疫细胞化学常用试剂介绍 2021/3/13 * 前列腺癌的免疫组化标记物 发表时间:2013-5-13 来源:《中外健康文摘》2013年第10期供稿 作者:胡新梅 于民 姜敏 2021/3/13 * 1 前列腺特异性抗原 前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)是分子量34000的单链糖蛋白,由237个氨基酸构成,它是一种丝氨酸蛋白酶,使凝固的精液溶解、液化。它是在1979年作为前列腺腺上皮细胞的标志物被发现的。血清PSA目前已被广泛应用于前列腺癌的早期筛查。 2021/3/13 * PSA在正常前列腺、前列腺增生、前列腺癌、前列腺上皮内瘤,均呈阳性表达,定位于上皮细胞的胞质中,而在前列腺转移癌则呈阴性表达,因此PAS阳性提示肿瘤来自前列腺上皮,可用于区分前列腺癌与前列腺转移癌[5]。PSA在前列腺良、恶性病变中均呈阳性表达,故PSA不能用于鉴别良恶性病变。几乎所有的前列腺癌（除了分化最差的癌和少数激素治疗后复发的进展期癌以外）PSA标记都阳性,而高分化前列腺癌的PSA表达强于低分化前列腺癌, 表明PSA表达与分化程度有关。而对于分化很差的癌,即使PSA阴性也不能完全排除前列腺癌,还要结合其他检查综合考虑。偶尔PAS阳性可出现在前列腺以外的组织和肿瘤,但一般为局灶性弱阳性 [6]。 2021/3/13 * [5]Harvey AM, Grice B, Hamilton C, et a1. Diagnostic utility of p504s/p63 cocktail, prost