代谢控制发酵基本技术应用.pptVIP

第三章 代谢控制发酵的基本技术 ;第一节：诱 变 ;二、诱变剂 1．诱变剂的概念：能够显著地提高微生物突变频率的理化因素 2．诱变剂的种类：一般有下列两大类： 物理诱变剂：紫外线、X射线、r射线、快中子、激光、超声波等。 化学诱变剂：亚硝酸、烷化剂、羟胺、硫酸二乙酯（DES）、亚硝基胍（NTC） 、重氮化合物等;3．紫外线 诱变原理：DNA分子强烈吸收紫外线，可引起DNA的断裂、DNA分子内部和分子间的交联、核酸与蛋白质的交联、嘧啶水合作用及形成嘧啶二聚体等。;诱变方法： (1)在诱变处??前，开启紫外灯，预热20min，使光波稳定。 (2)将10m1细胞悬浮液置于灭过菌的并带有磁力搅拌棒的直径的培养皿中，放置在磁力搅拌器的载物台上，紫外线照射10min进行培养皿的表面消毒 (3)开启磁力搅拌器，打开皿盖 (4)照射一定时间后，盖上皿盖，将培养皿取出，取1m1处理液稀释涂平板或中间培养。 ;4．亚硝酸 诱变原理：亚硝酸可以使碱基氧化脱氨，使A H 、C U、G X，从而改变了原来的碱基配对关系，引起突变。 诱变方法： (1)配制缓冲液及亚硝酸溶液灭菌备用。 2)取细胞悬浮液2m1，加入lml 0.1mo1/LNaNO2，加入1m1pH4.4醋酸缓冲液,27C保温处理一定时间。 (3) 取2m1处理液，加入pH8. 6的NaH2PO4溶液，调整PH值为7，诱变作用