[菠萝蛋白酶提取]果菠萝蛋白酶的提取失败原因.docVIP

[ 菠萝蛋白酶提取 ] 果菠萝蛋白酶的提取失败原因 菠萝蛋白酶提取 一、实验目的： 、了解菠萝蛋白酶的提取和纯化工艺 、优化和加深熟悉菠萝蛋白酶提取 二、实验原理： 菠萝蛋白酶 (Bromelain ，简称菠萝酶，亦称为凤梨酶或凤梨酵素 ) 是从菠萝果茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻干燥而得到的一种纯天然植物蛋白酶。其外观为浅灰色粉末状，分子量为 33000 ，等电点为 9.55 。品质最佳的菠萝蛋白酶是利用菠萝的中茎加工 , 采用超滤方法进行过滤浓缩 , 低温冷冻干燥而得的。产品已被广泛应用于食品、医药等行业。结果表明。提取菠萝中菠萝蛋白酶最佳提取工艺条件是添加单宁溶液的浓度为 0．2％，提取时最适 pH值为 6．5～8．5 左右，而最适提取温度为 60℃。菠萝蛋白酶作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化，啤酒澄清，还用于干酪、明胶及水解蛋白的生产。 在医药上它可以治疗水肿及多种炎症；它能 迅速溶痂，对正常组织无害，不影响植皮，适用于中小面积深度烧伤的治疗。 三、实验步骤 操作要点：菠萝蛋白酶的提取称取 1 kg 制备好的鲜果皮汁，加 5％苯甲酸钠溶液 10 ml 搅匀，以 4 000 r ／min 离心 7 min ，取上清液 倒人干净烧杯中。上清液分装在 6 个小烧杯中，每个装 100 ml 菠萝汁，分别缓缓加入空白、 0．1％、0．2％、0．3％、 0．4％、 0．6％单宁溶液 10 ml ，边加边拌约 1 5min ，沉淀物析出，静止 40 min 。虹吸除去上清废液，把酶复合沉淀物倒入离心杯中， 以 4 000 r ／min。离心 5 min ，倒掉上清废液，得到酶糊复合物。分离、洗涤和保护把提取的蛋白酶糊倒人烧杯中，加 0．1％EDTA溶液 100 ml 搅匀，再将1．5％氯化钠溶液 200 ml 倒人烧杯中搅匀，以 4 000 r ／min 离心 7 min，倒掉上清废液，得到洗涤剂 I 酶复合沉淀物。把洗涤剂 I 酶复合沉淀物倒入烧杯中，加 0．5％乙酸锌溶液 20 min ，搅拌均匀，静止 5 min ，加 0．06％抗坏血酸溶液 30 ml ，搅匀，静止 5 rain ，加1．5％氯化钠溶液 20 ml ， 搅匀，静止 5 min ，最后再加 0．5％EDTA溶液 20 ml ，搅匀，静 止 5min，以 4 000 r ／min 离心 7 min ，把上清废液倒掉，得到洗涤剂Ⅱ酶复合沉淀物。 把洗涤剂Ⅱ酶复合沉淀物倒入烧杯中， 加 0．5％ 硫代硫酸钠溶液 20 m1，搅匀，静止 5 min；加 1％L 一半胱氨酸溶液 10 ml ，搅匀，以 4 000 r ／min 离心 7 min ，倒掉上清废液，最后得 到蛋白酶糊。冷冻、干燥把提取的酶糊放入冰室中 ( 一 12℃) ，低温 冷冻 15～20 h ，取出解冻，离心得酶膏，把酶膏倒人装有氯化钙或 五氧化二磷的干燥器中干燥 6～10 h 得干酶，研磨成粉状，低温保存。 四、实验装置流程、仪器设备及 实验用菠萝采自农贸市场，以 7～9 分成熟为标准。菠萝皮肉、茎各部分分别经打碎、榨汁、纱布粗滤、离心 (4 000 r ／min 10 rain) 后得澄清液，存放于冰箱中备用。 榨汁机 JW一 5、离心机 LGl0—2．4A型、干燥器 ZJYY—XMT一 142、722 光栅分光光度计。 五、实验结果数据记录和分析 、pH=7、温度 =60 摄氏度 、pH=7、单宁浓度 2% 、单宁浓度 2%、温度六十摄氏度 六、实验数据处理 内容仅供参考