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改良线栓法大鼠脑缺血再灌注损伤模型的建立 缺血性脑血管病( Ischemic cerebral vascular disease ， ICVD)是神经科的常见病、多发病，缺血后再灌注损伤 (ischemia-reperfusion , IR)较为普遍［1］。目前制备大鼠大 脑中动脉缺血再灌注损伤模型中，线栓法大鼠大脑中动脉闭塞 (Middle cerebral artery occlusion ，MCAQ模型能最大程度 模拟人类缺血性卒中发生，被广泛用于实验性脑缺血再灌注 (Ischemia-reperfusion ，IR)损伤的研究［2］。传统的线栓法 脑缺血再灌注损伤模型， 多经颈外动脉插入线栓， 通过颈内动脉 到达大脑中动脉，以造成大脑中动脉供血区的缺血、梗死，缺血 2 h 后拔出线栓，形成再灌注损伤，从而成功制作模型 ［3-4］ ， 但该操作需分离颈总动脉、 颈内及颈外动脉， 操作时间相对较长， 对大鼠损伤较重。 在本实验中， 笔者通过改良， 仅分离颈总动脉， 颈内、颈外动脉近心端，在颈总动脉切一小口，将线栓经颈总动 脉，通过颈内动脉插入至大脑中动脉， 造成大脑中动脉供血区缺 血，缺血1 h后拔除线栓，成功制备了 MAC模型，现将该方法 介绍如下。 材料与方法 材料 1.1.1实验动物SPF级Wistar雄性大鼠60只，体重200? 250 g ，购自兰州大学实验动物中心。 1.1.2 主要试剂 3.6%水合氯醛， 10%多聚甲醛， 头端包被多 聚赖氨酸、已消毒的MCA戯栓［型号2432-A4，线头直径为 (0.32 ± 0.2 )、线身直径为 0.24 mm购自北京沙东生物技术 XX 公司。 方法 1.2.1 改良大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型的建立 参 考 Longa 等的报道， 随机选取 30 只雄性 Wistar 大鼠， 术前 12 h 禁食，但不禁水。采用 3.6%水合氯醛，对大鼠按 1 mL/100 g 体 重的剂量进行腹腔注射麻醉后。 剃须刀颈部皮肤备皮， 取仰卧位， 固定于手术台上，颈部用碘酒、酒精消毒后，取颈部正中切口， 长约2 cm，切开皮肤及皮下组织，锐性分离颈前正中肌群，将 肩胛舌骨肌向外侧牵拉， 颈前正中肌群向内侧牵拉， 暴露右侧颈 总动脉，小心剪开包裹颈总动脉( commoncarotid artery ， CCA) 及迷走神经的鞘膜，将颈总动脉与迷走神经分离开， 并沿CCA向 远端分离出颈内动脉(internal carotid artery ， ICA)及颈外 动脉(external carotid artery ，ECA 近心端，结扎 CCA近心 端，动脉夹夹闭CCA远心端，以5-0丝线在CCA中段放置一打好 结的丝线，勿收紧线结，用显微剪将CCA近心结扎端远侧剪一小 口，插入线栓，将丝线打紧，以保证线栓能自由活动，但又不经 动脉破口渗血；松开 CCA远端动脉夹，缓慢将线栓经 CCA ICA 置入大脑中动脉(middle cerebral artery ， MCA，当出现阻 力时即可停止前进， 以湿的生理盐水纱布覆盖颈部伤口， 线栓缺 血 1 h 后，取下覆盖创口的纱布，在麻醉状态下，缓慢拔出线栓 至CCA结扎CCA远心端后，完全退出线栓，去除牵拉肩胛舌骨 肌及颈部舌前肌群的缝线，缝合颈部皮肤。另设对照组 30 只， 颈部正中切口， 牵开颈部舌前肌群及肩胛舌骨肌， 分离 CCA、ECA 及ICA,结扎CCA近端及远端，不插入线栓，操作完毕后，缝合 肌肉及皮肤。两组大鼠术中均放置于恒温毯上，直至术后清醒。 两组大鼠术后均连续 3 d 肌注青霉素 4000 U/d 。 大鼠神经功能缺陷体征的观察 所有大鼠均在模型成 功后观察大鼠行为。参考 Zealong 评分标准进行神经功能评分 [4] 。0 分：无神经功能缺陷征； 1 分：一侧前肢部分屈曲； 2 分： 一侧前肢完全屈曲； 3分：向偏瘫侧转圈； 4 分：向偏瘫侧倾倒； 5 分：不能自发行走，意识丧失。 123 TTC染色和HE染色 所有大鼠分别于造模后 6 h断头 后取脑， 观察脑底有无血凝块， 动脉环有无血栓形成以排除蛛网 膜下腔出血和继发性血栓形成，将脑组织以生理盐水冲干净， -20 C放置15 min，行冠状位切片，厚度为 2 mm 置2% 2, 3, 5-三苯基氯化四氮唑(TTC中，避光37 C染色约20 min后， 4%多聚甲醛固定，放置于透明玻璃板上拍照。 1.2.4 脑梗死体积的测定 以图像分析软件( Image Pro-Plus , IPP)对脑梗死体积进行分析，采用梗死率表示梗死 体积(梗死体积比率：各切面梗死面积相加之各 / 各切面面积相 加之和x 100%。 结果 2.1 模型成功率 两组模型大鼠共 60只，其中