高效液相色谱介绍和应用.pptVIP

2021/3/14 * 离子对色谱法　主要用于分析离子强度大的酸碱物质。 分析碱性物质常用的离子对试剂为烷基磺酸盐,如戊烷磺酸钠、辛烷磺酸钠等。高氯酸、三氟乙酸也可与多种碱性样品形成很强的离子对。 分析酸性物质常用四丁基季铵盐,如四丁基溴化铵、四丁基铵磷酸盐。 2021/3/14 * 反相离子对色谱法常用ODS柱,流动相为甲醇-水或乙腈-水,水中加入3~10 mmol/L的离子对试剂，在一定的pH值范围内进行分离。被测组分保留时间与离子对性质、浓度、流动相组成及其pH值、离子强度有关。 2021/3/14 * 三、HPLC使用注意事项 2021/3/14 * HPLC的日常操作条件 最好是恒温、恒湿 温度:15~30℃ 相对湿度80% 房间应有良好的通风 空调或其他设备产生的气流不要直吹仪器 避免光线直射 远离高电干扰、高振动设备 2021/3/14 * （一）启动前检查 1. 流动相是否过滤 2. 水与有机溶剂混合时温度变化大,必须待恢复到室温时方可使用,否则易产生气泡。 3. 更换流动相时注意两种流动相必须具有互溶性， 2021/3/14 * 更换溶剂的一般方法:（1）取少量准备更换的流动相放在清洁的烧杯中,取出吸滤器,将吸滤头放在烧杯中用超声波振荡器振动清洗干净; （2）打开排液阀，按清洗键（purge），用新流动相清洗泵中的流动相； （3）关闭排液阀，启动泵，清洗流路； （4）连接色谱柱和检测器，用新流动相平衡色谱柱。 2021/3/14 * 4.更换不互溶性流动相时应先用异丙醇进行置换,然后每步都按（1）~（4）进行。 5. 更换缓冲盐流动相时,用纯水清洗，每步都按1~4进行。 6. 保持贮液瓶清洁，对专用贮液瓶应定期清洗;用试剂瓶作贮液瓶时，要经常更换。 2021/3/14 * 7. 定期在稀硝酸溶液中超声、清洗过滤器,保持过滤器畅通无阻。 8. 每天开始使用仪器时注意放空排气,确保泵头、流动池以及其它流路系统中无气泡存在。 2021/3/14 * （二）泵的使用与维护注意事项 1.防止任何固体微粒进入泵体（0.2um或0.45um的微孔滤膜过滤）。 2.流动相应先脱气,以免在泵内产生气泡,影响流量的稳定性。 3.流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内。 4.泵工作时防止溶剂瓶内的流动相用完，否则空泵运转会磨损柱塞、密封圈，导致漏液。 2021/3/14 * 5.输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力,否则会使高压密封环变形造成漏液。 6.使用缓冲液后用两通管连接管路及检测池,先用纯水冲洗，然后用甲醇冲洗。管路及检测池冲洗干净后再冲洗色谱柱。 反相柱先用含5%~7%甲醇的水冲洗色谱柱（此时不要再连接检测池），然后用甲醇或甲醇-水混合液冲洗。 2021/3/14 * 7.缓冲盐不得在色谱柱中过夜。 8.缓冲液使用前必须过滤。 9.磷酸盐、乙酸盐缓冲液易受到细菌和霉菌的影响,不得放置过夜,应临用现制。 注意:用缓冲液后不能直接换用有机溶剂 2021/3/14 * 流动相的贮存 流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯容器中,不能贮存在塑料容器中。 容器一定要盖严,防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。 容器应定期清洗，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。 2021/3/14 * 1. 使用流动相溶解样品 -- 减少溶剂峰,尤其是组分峰靠近溶剂峰时尤为重要 -- 保证样品在流动相中的溶解度,避免样品在系统中尤其在柱中产生沉淀 2. 进样前最好使用0.45um 的膜进行过滤。 样品处理 2021/3/14 * 手动进样阀 操作注意点: 1）样品溶液必须用0.45um的滤膜过滤 2）进样应使用液相色谱专用平头进样针 3）转动阀芯时不能太慢,更不能停留在进样阀的中间位置 4）常用密封垫的材质适用pH10,样品溶液pH小于10, 换特氟隆材质的密封垫pH10-13 5）每天分析工作结束后,要清洗进样阀 定子 转子 针头密封垫 弹簧 不锈钢套 进样阀的保养 2021/3/14 * 色谱柱的保养 8 9 4 5 6 1 2 3 7 0 xxxx xxxx xxxx xxxx xxxx xxxx xxxx xxxx xxxx 000 0 000 0 LC-10AD ::::::: 输液时不要打开排液阀 柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动 2021/3/14 * 当柱子和色谱仪联结时,阀件或管路一定要清洗干净 要注意流动相的脱气 避免使用高粘度的溶剂作为流动相 进样样品要提纯 控制绝对进样量 加预柱 预柱 2021/3/14 * 预柱套 预柱芯 预柱套 预