多糖各种提取方法.docxVIP

一、植物多糖得提取 １　溶剂提取法　 1、1　水提法 水对植物组织得穿透力强,提取效率高,在生产上使用安全、经济。用水作溶剂来提取多糖时,可以用热水浸煮提取,也可以用冷水浸提。一般植物多糖提取采用热水浸提法,该法所得多糖提取液可直接或离心除去小溶物;或者利用多糖不溶于高浓度乙醇得性质,沉淀提纯多糖;但由于不同性质或不同相对分子质量得多糖沉淀所需乙醇浓度不同,它也可以用于样品中不同多糖组分得分级分离;还可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同得多糖进行分离;其中,以乙醇沉淀最为普遍。但以根茎为主得植物体,细胞壁多糖含量高,热水直接提取率不高。此时为破坏细胞壁,增加多糖得溶出,有两种处理方法:一为酶解,二为弱碱溶解、 １.2酸碱提法 有些多糖适合用稀酸提取,并且能得到更高得提取率、但酸提法只在一些特定得植物多糖提取中占有优势,目前报道得并不多。而且即使有优势,在操作上还应严格控制酸度,因为酸性条件下可能引起多糖中糖苷键得断裂。 有些多糖在碱液中有更高得提取率,尤其就是提取含有糖醛酸得多糖及酸性多糖。采用得稀碱多位为0.1mol/L氢氧化钠、氢氧化钾,为防止多糖降解,常通以氮气或加入硼氢化钠或硼氢化钾。同样,碱提优势也就是因多糖类得不同而异。与酸提类似,碱提中碱得浓度也应得到有效控制,因为有些多糖在碱性较强时会水解。另外,稀酸、稀碱提取液应迅速中与或迅速透析,浓缩与醇析而获得多糖沉淀。 １.４ 生物酶提取法　 酶技术就是近年来广泛应用到有效成份提取中得一项生物技术,在多糖得提取过程中,使用酶可降低提取条件,在比较温与得条件中分解植物组织,加速多糖得释放或提取。此外,使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等得产物,常用得酶有蛋白酶,纤维素酶,果胶酶等、 1。5 超声提取法 超声波就是一种高频率得机械波,其主要原理就是利用超声波产生得“空化作用”对细胞膜得破坏,有利用植物有效成分得释放,而且超声波能形成强大得冲击波或高速射流,有效地减小、消除与水相之间得阻滞层,加大了传质效率,有助于溶质得扩散。另外,超声波得热效应使水温基本在５7℃,对原料有水浴作用。超声波提取与传统得提取方法相比,有提取效率高、时间短、耗能低等优点、超声提取得影响因素有:超声时间、超声频率(一般低频中提取效率高,但也有例外)、料液比与温度等。 1。6 微波提取 微波就是频率介于３０0MHz与30０GHz之间得非电离电磁波,微波提取得原理就是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部,由于溶剂及细胞液吸收微波能　细胞内部温度升高,压力增大,当压力超过细胞壁得承受能力时,细胞壁破裂,位于细胞内部得有效成份从细胞中释放出来,传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。微波技术应用于植物细胞破壁,有效地提高了收率。具有穿透力强、选择性高、加热效率高等特点、影响微波浸提得主要因素为浸提时间、样品与提取溶剂得含水量,溶剂得介电常数与电导率(介电常数与电导率得溶剂对微波得吸收较好)、微波功率等、但就是由于微波泄漏对操作者影响很大,因而对设备得要求较高,这对微波得研究及应用带来了一定得困难。 二、植物多糖得分离纯化 在多糖提取物中,常会有无机盐、蛋白质、色素及小分子物质等杂质,必须分别除去.一般就是先脱除非多糖组分,再对多糖组分进行分级。 2.1 除蛋白 除蛋白质时一般选择能使蛋白质沉淀而不使多糖沉淀得试剂来处理,如酚、三氯乙酸、鞣酸等、但必须处理时间短,温度低,避免多糖降解。Sevaｇe法(氯仿:戊醇／丁醇=4:1)与三氟三氯乙烷法在避免降解上有较好效果但要达到除尽游离蛋白质得目得仍需反复处理。如能加入蛋白质水解酶,使蛋白质大分子进行一定程度得降解,再用Sevagｅ法处理,一般效果更好、 为了避免使用有机溶剂也可采用反复冻融得方法除蛋白,将多糖液浓缩后,一20℃室温反复冻融７～8次,离心除去蛋白质、另外,蛋白质在等电点时溶解度最小,用氢氧化钙饱与液调pH10～pＨ１1可除去偏碱性得蛋白质,然后再用硫酸调pＨ5~pH6,可除去偏酸性得蛋白质。冻融与等电点沉淀除蛋白质操作简单,但多糖液里往往有低浓度得蛋白质残留,应与其它方法结合使用、 ２.２ 脱色 植物多糖提取物中含有酚类化合物而使其颜色较深,可用吸附剂(纤维素、硅藻土、活性炭等)、离子交换柱(ＤEAE一纤维素)、氧化剂(H２Ｏ2)等脱除。活性炭比表面积大,吸附能力强,在进行当归多糖得提取时只向多糖液中加入了0、1％左右得活性炭,煮沸后滤过即完成了脱色操作。此法成本低廉,适合工业化生产。 2。３ 除小分子杂质 小分子杂质如低聚寡糖得残留往往影响多糖得生物活性,需要进一步脱除,提高纯度。传统得方法就是透析法,该法操作简单、技术成熟,但周期长,往往需要2一3天,常温下操作有可能造成多糖得霉变,必要时需加入少量防腐剂或需在低温条件下