基因工程的基本操作程序.pptVIP

2021/3/17 * 步骤三、将目的基因导入受体细胞 1 转化： 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞 内维持稳定和表达的过程。 2 常用的受体细胞： 大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌 和动植物细胞等。 3 目的基因导入受体细胞的原理： 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 2021/3/17 * 1、目的基因导入植物细胞的方法 （1）农杆菌转化法 ①农杆菌特点:易感染双子叶植物和裸子植 物,对大多数单子叶植物没有感染能力。 ②原理:Ti质粒上的T-DNA可以转移到受体细胞,并整合到受体细胞染色体的DNA上。 2021/3/17 * 三、目的基因导入受体细胞 构建基因表达载体 转入 农杆菌 植物细胞 导入 稳定维持和表达 ③过程: 2021/3/17 * 1、目的基因导入植物细胞的方法 （2）基因枪法: 常用于单子叶植物,成本较高 （3）花粉管通道法: 我国独创,十分经济简便,如抗虫棉 2021/3/17 * 2、将目的基因导入动物细胞 方法:显微注射法 2021/3/17 * 3、将目的基因导入微生物细胞 ①微生物作受体细胞原因: 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 ②常用菌:大肠杆菌 ③常用法:Ca2+处理获得感受态细胞 ④过程: Ca2+处理 大肠杆菌 感受态 细胞 感受态细胞 吸收DNA 表达载体 与感受态 细胞混合 2021/3/17 * 四、目的基因的检测与鉴定 导入过程完成后,全部受体细胞都能摄 入重组DNA分子吗? 1 真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少。 2 目的基因进入受体细胞后,是否都能稳定维持和表达? 不一定,需要检测 2021/3/17 * 1、鉴定——分子水平的鉴定 转基因生 物的DNA 探针 15N 15N 14N 14N （1）检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了 目的基因 基因探针: 放射性同位素等标记的含有目的基因DNA片段 方法—— DNA分子杂交技术 变性 变性 2021/3/17 * 1、鉴定——分子水平的鉴定 变性 方法—— 分子杂交技术 （2）检测目的基因是否转录出了mRNA 探针 15N 15N 转基因生物 的mRNA 14N 14N 2021/3/17 * 1、鉴定——分子水平的鉴定 提取 （3）检测目的基因是否翻译成蛋白质 方法——抗原-抗体杂交 苏云金杆菌 Bt毒素蛋白 将Bt毒蛋白注射小鼠体内 从小鼠血管抽出血液分离出抗Bt毒素的抗体 抗体 蛋白质 出现杂交带 脱分化 组织培养 2021/3/17 * 2、鉴定——个体水平的鉴定 抗虫、抗病接种实验,活性比较实验 　　例:用棉铃饲喂棉铃虫,如虫吃后不出现中毒症状,说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡,则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 2021/3/17 * 学习展示 1、有关基因工程的叙述中,错误的是( ) A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、人工合成目的基因不用限制性内切酶 A 2021/3/17 * 学习展示 2、下列属于获取目的基因的方法的是( ) ①利用mRNA反转录形成 ②从基因组文库中提取 ③从受体细胞中提取 ④利用PCR技术 ⑤利用DNA转录 ⑥人工合成 A.①②③⑤ B.①②⑤⑥ C.①②③④ D.①②④⑥ D 2021/3/17 * 学习展示 3、有关基因工程的叙述正确的是 （ ） A、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成 C、质粒都可作为运载体 D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 D 2021/3/17 * 学习展示 4、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中,不进行碱基互补配对的步骤是 （ ） A、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合 C、将目的基因导入受体细胞 D、目的基因的检测和表达 C 2021/3/17 * 学习展示 即时应用(随学随练,轻松夺冠) 5．(2009年高考浙江卷)下列关于基因工程的叙述,错误的是(　　) A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶 C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性 D．载体上的抗性基因有利于筛选