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肾母细胞瘤动物模型的建立及其实验治疗研究的系列研究 复旦大学附属儿科医院外科 二零零三年九月 目录 TOC \o 1-5 \h \z 前言 4 —、理论依据 4 二、 研究内容和目的 4 三、 国内外现状 5 四、 创造性和先进性 5 五、 临床意义和推广前景 5 第一部分 DMH诱导鼠肾母细胞瘤模型建立及 维生素A对肿瘤生成的干预实验 7 材料和方法 7 结果 11 第二部分 人肾母细胞瘤裸小鼠皮下移植模型 建立及基因治疗研究 22 材料和方法 22 结果 24 第三部分 人肾母细胞瘤裸小鼠原位移植模型 建立及维甲酸诱导分化实验研究 41 材料和方法 41 结果 43 讨论 53 一、 肾母细胞瘤动物模型建立的意义及三种动物模型的比较 53 二、 维生素A对肾母细胞瘤发生的影响 54 三、 肾母细胞瘤的维甲酸诱导分化治疗初探 57 四、 肾母细胞瘤基因治疗实验研究 58 结论 59 参考文献 60 论文附页 61 论文附录： 毕允力高解春一、肾母细胞瘤裸鼠移植瘤模型的建立及其生物特性 姚明 毕允力高解春 中华小 儿外科杂志 2000； 21 (2) : 115 二、 5—氟胞D密唳对表达胞D密唳脱氨酶的人肾母细胞瘤裸鼠异种移植瘤的疗效 毕允力高解春许德华 中华肿 瘤杂志 2000； 22 (2) : 113 三、 维生素A对大鼠肾母细胞瘤发生影响的实验研究 李凯高解春 陈莲张亮 中华小 儿外科杂志 2002； 23 (5) : 458 四、 人肾母细胞瘤裸小鼠肾原位移植模型的建立和生物学特性的研究 何小伟袁胜涛高解春 中华小 儿外科杂志 2003； 五、视黄酸受体基因在人胚肾上腺及神经母细胞瘤中的表达 王尔松高解春杨毅 复旦 学报(医学版)2002； 29 (3) : 157 六、肾母细胞瘤与胚胎肾发育及肾源性剩余的关系 解春陈莲 王金根高 中华泌 尿外科杂志 2000； 21 (2) : 84 七、WT1蛋白在肾母细胞瘤与肾发育过程中的表达 解春陈莲 王金根高 中华小 儿外科杂志 2000； 21 (3) : 156 八、肾母细胞瘤16q杂合子丢失及其临床意义 高解春陈莲 张亮 中华小 儿外科杂志 2002； 23 (3) : 202 九、肾母细胞瘤CD44V6表达及其意义 金根髙解春陈莲 王 中华小 儿外科杂志 2000； 21 (6) : 334 十、维甲酸对肾母细胞瘤分化诱导和生长抑制的实验研究 袁胜涛 何小伟高解春 (待发 表) 十一、肾母细胞瘤和肾发育过程中端粒酶的原位表达 陈莲 李凯高解春 （待 发表） 刖吞 —、立论依据 肾母细胞瘤由后肾胚基极其类似肾母细胞瘤了的成分发展而成，是小儿最常见的恶性肿瘤之一。 仅管随着化疗药物的更新和综合治疗的完善，肾母细胞瘤患儿的生存和预后都得到了极大的改 善。但是由于肿瘤部位隐匿，病程发展较快，缺乏特异性肿瘤标记，早期诊断困难而无临床特征, 使就诊时已为临床m期的患儿高达39.2%,因此探讨肾母细胞瘤的生物特性，探索新的治疗方 法和提高生存率及生存质量仍是小儿肿瘤医师的一个努力方向。 建立合适的动物模型，模拟人肾母细胞瘤的生物学特性和行为，无疑将为肿瘤的基础和实验研究 创造良好的条件，并可为临床应用的开展进行前期的准备。国外的研究亦有药物诱导大鼠肾母细 胞瘤及裸鼠皮下移植肾母细胞瘤成功的报道。而原位移植肾母细胞瘤动物模型报道较少，且后两 者在国内尚无报道，因此探索和建立理想的动物模型研究平台将具有重要的意义。 维生素A的诱导分化治疗研究已较多的应用于血液肿瘤的治疗，在肾母细胞瘤中的作用的探索尚 属起步阶段。但它在小儿胚胎性恶性实体瘤中的作用正在逐步引起重视。研究维生素A类物质的 诱导分化作用及机制无疑对研究胚胎性肿瘤的病因和指导胚胎性肿瘤的治疗有重要的意义。 基因治疗将成为除传统的手术、化疗和放疗以外新型的治疗方法。由于其具有在彻底有效的杀灭 肿瘤细胞的同时而不损伤周围正常组织的优越性，使其成为了许多学者研究的方向。国外研究发 现，随着有关肿瘤发生发展的机制，如细胞周期、细胞免疫和癌基因等研究的深入及运用分子生 物学技术构造病毒载体等系统不断进步的情况下，肿瘤基因治疗已越来越接近临床。因此开拓基 因治疗在肾母细胞瘤治疗中的作用，无疑将大大推动小儿肿瘤治疗的发展。 二、 研究内容和目的 本课题建立了肾母细胞瘤的系列动物模型，包括药物诱导大鼠肾母细胞瘤，裸鼠皮下移植瘤模型 及裸鼠原位移植瘤模型，比较了三种动物模型的优点及存在的缺限，并进行了相关的生物学特性 研究和治疗实验研究。 在实验中应用流式细胞仪检测，组织病理学观察，细胞图像分析，免疫组织化学，原位杂交及 RT-PCR等现代技术，对各种模型的肾母细胞瘤的生物学特性进行了详尽的描述，为肾母细胞瘤 在化疗，基因治疗和药物诱导