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《生物分离工程》知识点讲解整理 《生物分离工程》知识点讲解整理 生物分离工程 第一章 (绪论) 生物分离工程的定义和过程 生物分离工程定义 ( 名词解释 ): 为提取生物产品时所需的原理、方法、技术及相关硬件设备的总 称, 指从发酵液、动植物细胞培养液、酶反应液和动植物组织细胞与体液等提取、分离纯化、富集生物产品的过程。过程 : 目标产物捕获 目标产物初步纯化 ( 萃取、沉淀、吸附等方法 ) 目标产物高度纯化和精制 细胞分离三种手段 : 重力沉降离心沉降过滤 第二章 离心分离原理和方法 : 原理 : 离心沉降是在离心力的作用下发生的。 单位质量的物质所受到的离心力 : 式 : r 为离心半径 , 即从旋转轴心到沉降颗粒的距离 ; 1/21 《生物分离工程》知识点讲解整理 ω 为旋转角速度 ; N为离心机的转数 ,s-1 方法 :(1) 差速离心分级 区带离心 ( 差速区带离心、平衡区带离心 ) 离心分离设备 : 离心力 ( 转速 ) 的大小 : 低速离心机、高速离心机、超离心机 按用途 : 分析性、制备性 按工业应用 : 管式离心机、碟片式离心机 实验室用以离心管式转子离心机 , 离心操作为间歇式 悬浮液的预处理方法和目的 : 方法 : 加热 : 最简单和最廉价的处理方法。黏度、促凝聚、固体成分体积、破坏凝胶结构、增加空隙率 调 pH值: 方法简单有效、成本低廉 凝聚 : 在凝聚剂 ( 如铝盐、铁盐、石灰和 NaCl) 作用下 , 细胞蛋白 质等胶体去稳定 , 并聚集成 1mm大小的凝聚块的过程。 ( 机理 : 破坏双电 层, 水解后胶体吸附 , 氢键结合等 ) 絮凝 : 在絮凝剂高分子聚合电解质的作用下 , 胶体颗粒和聚合电解质交连成网 , 形成 10mm大小的絮凝团过程。 ( 机理 : 絮凝剂主要起和电荷、桥架和网络作用 ) 2/21 《生物分离工程》知识点讲解整理 惰性助滤剂 : 一种颗粒均匀、质地坚硬的粒状物质 , 用于扩大过滤表面的适应范围 , 减轻细小颗粒的快速挤压变形和过滤介质的堵塞。 ( 使用方法 : 预涂层 ; 按一定比率混合。助滤剂种类 : 硅藻土、纤维素、未活化的炭、炉渣、重质碳酸钙等。 ) 目的 : 提高过滤速度和过滤质量是过滤操作的目标。 各种细胞破碎技术原理和优缺点 : 原理 : 许多生物产物在细胞培养过程保留在细胞内 , 需破碎细胞 , 使 目标产物选择性地释放到液相。破碎的细胞或其碎片去除后 , 上清液用于进一步的分离纯化。 细胞破碎技术分为 : 机械破碎法、化学法、物理渗透法 机械法和化学法的比较 机械破碎法缺点 : A、高能、高温、高噪音、高剪切力 , 易使产品变性失活 ; B、非专一性 , 胞内产物均释放 , 分离纯化困难 ; C、细胞碎片大小不一 , 难分离。 化学破碎法缺点 : A、费用高 ; B、化学或生化试剂的添加引起新的污染 ; C、破碎速度低 , 效率差 , 一般只有有限的破碎 , 常与机械 法连用。 3/21 《生物分离工程》知识点讲解整理 物理渗透法 优点 : 条件比较温和 , 有利于目标产物的高活力释放回收。 缺点 : 破碎效率较低、产物释放速度低、处理时间长、不适于大规 模细胞破碎 , 局限于实验室规模的小批量使用。 包含体的解决方法 ( 一般步骤 ): ( 一) 包含体的分离纯化 ( 二) 包含体溶解 ( 可溶性变性、还原蛋白质 ) ( 三) 变性蛋白质的复性和重新氧化 ( 四) 蛋白质一般的分离纯化 第三章 沉淀的概念与结晶的区别 : 沉淀 : 沉淀是物理环境的变化引起溶质溶解度降低、生成固体凝聚物的 现象。具有浓缩与分离的双重作用。 联系 : 在本质上都是新相析出的过程 , 主要是物理变化。 区别 : 结晶为同类分子或离子以有规则排列形式析出 ; 沉淀为不定 形的固体颗粒 , 构成成分复杂 , 纯度低。 蛋白质表面性质 : 蛋白质表面由不均匀分布的荷电基团形成的荷电区、亲水区和疏水区构成。 4/21 《生物分离工程》知识点讲解整理 蛋白质水溶液呈胶体性质 使蛋白质形成稳定的胶体溶液、凝聚沉淀的因素: 水化层和双电 层 影响盐析的因素 : 无机盐 ( 种类、浓度 ) 、温度和 pH值 硫酸铵盐析的特点 : 价格便宜、溶解度大且受温度影响很小、能稳定蛋白质 (酶)。 几种沉淀的方法和优缺点 : ( 盐析沉淀、等电点沉淀、有机溶剂沉淀、热沉淀的原理和优缺点 ) 盐析沉淀原理 蛋白质溶液的离子强度增大时 , 蛋白质表面的双电层厚度降低 , 静 电排斥作用减弱。盐离子的水化作用使蛋白质表面疏水区附近的水化 层脱离蛋白质 , 暴露出疏水区域 , 增大了蛋白质表面疏水区之间的疏水 相互作用 , 容易发生凝集 , 进而沉淀。 优点 : 盐析广泛应用于各