甘蓝型油菜小孢子加倍培养技术.docxVIP

甘蓝型油菜小孢子加倍培养技术 自 Lichter 等 [1]1981 年首次报道了甘蓝型油菜游离小孢子 培养并成功获得了再生苗 ,在后来的 20多年里 ,国内外学者已经 成功地在甘蓝型油菜中建立了小孢子培养技术体系 , 特别是用此 种方法从培育的DH群体中获得的多种油菜品种已经在生产中得 到了广泛的认可。现将甘蓝型油菜小孢子加倍培养技术介绍如 下。 选取花蕾 一般在天气晴朗的 8~10时取材, 如遇阴雨天气 ,为了不影响 试验进程也可取材 , 但一定要选取生长良好的花序 , 研究报道低 温有利于小孢子的胚胎发生。 尽量选取主花序或生长状态较好的 花序，然后在实验室选取大小在 2.5?3.5mm的花蕾备用。不同的 材料花蕾的发育时期不尽相同 , 可以剥蕾挑取小孢子进行镜检以 确定发育时期 , 最佳时期为单核晚期至二核期。花药为淡绿色呈 透明状。取蕾以后如果不能立刻进行小孢子的提取 , 应将花蕾放 置于湿润的条件下低温保存。 游离小孢子分离 先用75%勺医用酒精将花蕾表面灭菌 30?60s,再用0.1%升 汞消毒花蕾表面15min,再用无菌水冲漂洗3次，每次5min。将消 毒的花蕾置于灭过菌的玻璃管中，加约2mL B5提取液,用灭菌玻 璃棒将花蕾研碎 , 压出花粉小孢子 , 通过 2 层槽式无菌滤纸 , 或 45卩m的尼龙网，或0.22卩m孔径的微孔滤膜过滤，把滤液倒入灭 菌了的带盖