第十章-动物组织与胚胎工程.pptVIP

2021/3/26 * 胚胎移植产出的犊牛 2021/3/26 * 一次移入三枚胚全部成活 2021/3/26 * 受体母羊与所生羔羊 2021/3/26 * 二、胚胎嵌合嵌合体（chimera）是指在同一个体中,由于基因型不同的细胞或组织互相接触,且各自独自并存的状态发育早期,如卵裂球甚至受精卵所形成的嵌合体称为原发性嵌合体,而把在发育的较晚期,如胚层已经分化,或器官开始形成后,通过组织移植或嫁接等方法所形成的部分组织或器官的嵌合,称为次生性嵌合体 2021/3/26 * 胚胎嵌合方法聚合法第一种可以利用胚胎与胚胎聚合,即使用发生致密化后的胚胎,用酸性台氏液（pH2.5）或0.5％链霉蛋白酶除去透明带,充分洗涤后,放入含有5μg/ml植物凝集素A（PHA）的聚合液滴中。让一个胚胎垂直位于另一胚胎之上,借机械压力和PHA的作用,更易聚合。若放到37℃时,效果更佳,聚合完毕后,洗除PHA,继续培养,或进行胚胎移植。 2021/3/26 * 第二种是利用卵裂球或细胞与胚胎聚合,将胚胎卵裂球解离或用其他游离的细胞,与胚胎聚合。当用一个已经除去透明带的胚胎时,将卵裂球或细胞在胚胎的正上方慢慢释放,使两者直接接触,借助PHA的作用使之聚合。当用两个无透明带胚胎时,以类似“三明治”的方式,把细胞放到两个胚胎之间,使之聚合。第三种利用两种细胞间聚合。聚合时,各取数个细胞或卵裂球,放入空透明带内,用PHA使之聚合在一起,并用琼脂包埋。通过中间受体培养一段时间后,观察其发育的情况。 2021/3/26 * 囊胚注射法把某些种类细胞注射入囊胚的囊胚腔中,注射的细胞可以是卵裂球、内细胞团细胞、胚胎干细胞,甚至是已经分化的细胞。若注入的细胞参与胚体的形成,那么就形成了嵌合体。注射时,选取健康、生长良好的细胞。如果是培养细胞,应该保证其整二倍体性。将10－12个细胞吸入到注射吸管的顶端。用固定吸管吸住内细胞团与滋胚层交界处,让内细胞团位于囊胚的底部位置。调整注射吸管与固定吸管使处于同一焦点平面,选择滋胚层细胞间的“间隙处”,将注射吸管插入囊胚腔。将细胞推入囊胚腔,使之落到内细胞团之上。操作后的囊胚形态不规则,经短期培养后,可以恢复正常状态。 2021/3/26 * 有色鼠与白色鼠胚胎融合 2021/3/26 * 胚胎嵌合的鉴定两种:色素分析法和遗传分析法色素分析法简单、直观,比较实用。一般选用肤色、毛色差异明显的动物的胚胎作为供体胚,如用白鼠或黑鼠。幼鼠生下4－5天后,就可以分析其肤色或毛色,怀孕10天左右的小鼠胎儿,眼睛就有色素沉积。或者在出生时,检查眼睑色素情况,确定是否是嵌合体。 2021/3/26 * 使用同工酶分析 首先分析动物特定的同工酶谱系,然后选择具有不同图谱的两种或多种动物作为供体动物提供胚胎。 如果获得的动物是嵌合体,那么同工酶谱中应显现与供体动物相对应的特定谱带,不同品种动物的同工酶均有表现。 2021/3/26 * 现在比较常用的是磷酸葡萄糖异构酶（GPI）分析,其原理是果糖－6－磷酸在GPI作用下,产生葡萄糖－6－磷酸,在6－磷酸葡萄糖脱氢酶和NADP作用下,使G－6－P成为6－磷酸葡萄糖酸盐,NADP还原为NADPH。经GPI染液染色,可显示出同工酶谱带。 分析时,从嵌合动物中取不同组织器官,匀浆后制成电泳样本,在醋酸纤维素板上点样,电泳、染色处理。与标准的同工酶谱对照,鉴定是否是嵌合体。 2021/3/26 * 胚胎嵌合的意义胚胎嵌合技术可以作为研究分析哺乳动物发生机制的重要手段,例如研究卵裂球分化潜力,研究性分化机制与性比,研究X染色体失活及其作用和研究胚胎细胞基因表达的机制;也可以对生理功能分析的应用,例如对免疫功能、遗传病的研究分析;还可以培育杂种个体,甚至是种间杂种;可以通过制作各种组合的嵌合体,培育新的毛皮动物;利用种间移植,分析胎儿和母体的相互关系。 2021/3/26 * 2021/3/26 * 三、胚胎分割 １、胚胎分割的原理 根据卵裂球具有发育成为一个个体的全能性的特点,人们就考虑用这种实验技术,生产同卵双胎或多胎,以加速优良种群的繁殖。 胚胎的分割在不同时期有不同的分离培养方法,如卵裂球分离培养法、致密化前各期胚胎分割法、桑椹胚至囊胚期胚胎分割法等。 2021/3/26 * 同卵双生 2021/3/26 * ２、卵裂球分离培养 卵裂球分离培养是将桑椹胚以前的卵裂胚去掉透明带,分离每个卵裂球,将其包埋于琼脂中,将包有卵裂球的琼脂柱,移到中间受体小鼠或兔的输卵管中,经数日活体内培养后,再取出已经发育到多细胞的胚胎,移于受体子宫。 这种方法已经在牛、羊、马生出同卵多胎。 对研究卵裂球位置与分化方向以及研究嵌合胚、不同卵裂球遗传性等,都是一种很有用的技术。 2021/3/26