调控高密度脂蛋白相关代谢通路的机制性和临床.docxVIP

河北医科大学 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。 本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表 与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试 验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。 否则，承担相应法律责任。 研究生签名：南l住导师签章：刍％学 ；．-Ijt医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写， 文责自负。 研究生签名：吉j位 导师签章： 南≯飞化 芦Ir年y月·6目 万方数据 目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 8 英文缩写 ．16 研究论文microRNA-28．5p调控高密度脂蛋白相关代谢通路的机制性研 究和临床研究 引言 18 第一部分microRNA．28．5p生物信息学靶基因在HepG2细胞中的验证 前言日Ⅱ舌 。。20。。ZU 材料与方法 21 结果 28 附图 29 附表 ： ．．32 讨论 33 小结 37 参考文献 37 第二部分microRNA．28．5p通过靶向抑制ERK2上调ABCAl表达 前言日U舌 424Z 材料与方法 43 结果 50 附图 51 {寸{仑 54 小结 57 参考文献 57 第三部分microRNA一28．5p对LXRa．ABCAl／ABCGl通路的影响 前言 62 材料与方法 63 结果 73 附图 75 讨论 81 万方数据 小结 小结 84 参考文献 84 第四部分microRNA．28．5p在不稳定型心绞痛患者中的表达及意义 前言日Ⅱ舌 8989 材料与方法 90 结果 94 附图 96 附表 98 讨论 100 小结 103 参考文献 103 结j沧 106 综述三磷酸腺苷结合盒转运体在动脉粥样硬化中的研究进展 ．．1 07 致谢 131 个人简历 132 万方数据 中文摘要mieroRNA一28-5p调控高密度脂蛋白相关代谢通路的 中文摘要 mieroRNA一28-5p调控高密度脂蛋白相关代谢通路的 机制性研究与临床研究 摘 要 microRNAs(miRNAs)是一类非编码小分子RNA，通过与信使RNA (messager RNA，mRNA)3’端非编码区(3’untranslated region，YUTR)序 列结合，抑制靶mRNA翻译或促进mRNA降解。miRNAs作为精细调控因 子，在机体复杂的病理生理过程中发挥着重要作用。研究证实，miRNAs (miR-1、miR-133和miR-499)被证实参与调控心脏发育和心血管系统的正 常生理调控过程。miRNAs在时间和空间上表达谱的改变均可提示不同的 病理过程(如急性心肌梗死、心衰)。近年来，血浆miRNAs分子因其稳 定性和易检测性在心血管研究领域中已越来越受到人们的广泛关注，为揭 示其分子生物学功能提供新的线索，并有望成为疾病诊断和分子治疗的靶 标。 miR-28作为内含子型miRNA，定位于3号染色体L蹦区域LPP(Lipoma Preferred Partner)基因。尽管miR-28的生物学功能研究尚不充分，但已有 研究表明miR-28可参与调控细胞增殖、分化和凋亡，并异常表达于骨髓增 生异常综合征患者的血小板中以及宫颈癌、结直肠癌患者的外周血中。最 新研究证实，内含子型miR-28可直接靶向抑$1]LPP基因的表达，而LPP的 生物学功能主要是促进细胞的迁移和粘附，并在人类肿瘤中处于高表达状 态。值得关注的是LPP被证实可促进受损血管平滑肌细胞的迁移和增殖， 促进粥样斑块的形成和发展，因此基于内含子miR-28与宿主基因LPP的作 用方式，我们推测miR-28可能参与了动脉粥样硬化的病理过程，但具体作 用机制除了可靶向抑$1JLPp基因的表达对其他靶基因和作用机制还尚不 明确。 本研究拟在体外细胞学实验中选取和动脉粥样硬化发生机制较为紧 密的HepG2和THP一1分化的巨噬细胞，采用瞬时转染的方法将miR．28．5p 模拟物或抑制物转入细胞中获得高或低表达的细胞模型。结合生物信息学 软件对miR-28—5p的靶基因进行预测，采用分子生物学技术对Nrf2／ Mad2／ERk2进行验证，并拟选定ERK2作为进一步探讨miR-28．5p生物学功 万方数据 中文摘要能的主要基因。通过实时定量PCR和蛋白免疫印迹技术探求miR-28．5p是 中文摘要 能的主要基因。通过实时定量PCR和蛋白免疫印迹技术探求miR-28．5p是 否参与调控ERK2