蛋白偶联雌激素受体激动剂抑制人主动脉平滑肌细胞迁移作用.docxVIP

摘要摘要 摘要 摘要 目的：血管平滑肌细胞(VSMC)迁移在心血管系统疾病如动脉粥样硬化的发 生、发展以及肿瘤形成中具非常重要作用。雌激素在动脉粥样硬化形成及发展 过程中具重要保护作用。GPR30(G．protein coupled estrogen receptor)作为雌激 素受体可被雌激素及其特异性激动剂G．1激活从而调节细胞增殖、迁移等功能。 本实验旨在通过运用GPR30特异性激动剂G．1来研究GPR30激活对PDGF—BB 诱导的VSMC细胞迁移的影响，以及GPR30激活对细胞迁移相关基因MMP2 和MMP9表达及相关信号通路激酶的影响。 方法：采用人主动脉平滑肌细胞系(human aortic smooth muscle cell，hASMCs) 为实验用细胞，PDGF．BB作为诱导细胞迁移的外源因子。经划痕试验检测G．1 对细胞迁移作用的影响；通过RT-PCR及Western Blot方法检测GPR30在 hASMCs细胞系中的表达情况；并通过GPR30 siRNA干扰方法使GPR30沉默， 验证G．1对细胞迁移作用是否通过GPR30而产生；通过Real．time PCR及 Western Blot方法检测G．1激活GPR30对细胞迁移相关基因MMP2和MMP9 表达的影响；用MAPK、EGFR抑制剂PD98059和AGl478检测MAPK、EGFR 激酶等信号通路是否参与G．1激活GPR30对细胞迁移的影响。 结果：1．G一1抑制PDGF．BB诱导的hASMCs细胞迁移，G．1处理8 h后具最佳 抑制效果，并且G．1对细胞迁移的抑制具有浓度依赖性。2．GPR30在hASMCs 细胞中有表达。3．hASMCs细胞中GPR30表达沉默可逆反G．1抑制细胞迁移作 用。4．G．1下调PDGF．BB诱导的MMP9表达，对MMP2表达没有明显影响。 5．PD98059和AGl478不影响G．1对细胞迁移的抑制作用。 结论：G．1通过激活GPR30受体而抑制PDGF．BB诱导的hASMCs细胞迁移 并具有浓度依赖性；G．1激活GPR30受体后下调PDGF．BB诱导的MMP9表 达而不影响MMP2表达；G．1不通过激活MAPK、EGFR而抑制细胞的迁移。 关键词： 细胞迁移GPR30 G．1 siRNA干扰 AbstractAbstract Abstract Abstract objective：Migration of vascular smooth muscle cells fVSMC)is involved in development of cardiovascular system diseases(e．g．atherosclerosis)and formation of tumors．Estrogens mediate the processes of atherosclerotic formation．GPR3 0 (G。protein coupled estrogens receptor)can be activated by estrogens its specificity agonist．G-1 to regulate cellular activities，such as proliferation and migration．This study aims to investigate the effects of GPR3 0 on VSMC migration，and the effect of GPR3 0 activation on cell migration related gene MMP2／MMP9 expression．The involvement of signaling pathways，such as MAPK and EGFR，are also evaluated． Methods：We applied platelet derived growth factor(PDGF．BB)to stimulate migration of human aortic smooth muscle cell(hASMCs)．The scratch assay was performed to detect effect of G一1 on cell migration．RT-PCR and Western Blot were used to detect the expression of GPR3 0 in hASMCs．After GPR3 0 siRNA was transfected into the cells to down-regulation GPR30 e