发酵无菌技术 剖析.ppt

第四章 发酵工业的无菌技术;纯种培养要求必须防止杂菌污染 为防止染菌，采取了一系列措施： 密闭式发酵罐、无菌空气、无菌室、培养基和设备灭菌、无菌操作； 染菌无法彻底避免；据报道： 国外抗生素发酵染菌率为2％~5%，国内抗生素发酵、青霉素发酵的染菌率为2％，链霉素、红霉素和四环素发酵染菌率为5%，谷氨酸噬菌体感染率为1％～2％。 染菌影响产率、质量、三废治理都有很大的影响。;一、污染的危害;2.染菌危害的具体分析;B. 霉菌 PenG：青霉素水解酶上升，PenG迅速破坏，发酵一无所获。 柠檬酸：pH2.0，不易染菌，主要防止前期染菌。 C. 酵母菌: 易污染细菌以及野生酵母菌 。 D. 疫苗：无论污染的是活菌、死菌或内外毒素，都应全部废弃。 ;（2）染菌种类对发酵的影响;（3）不同发酵时期染菌对发酵的影响;b. 污染酵母：加入0.025~0.035g/L CuSO4抑制酵母；通风加大，加速产酸。 c.染黄曲霉：加入另一罐将近发酵成熟的醪液，pH下降，黄曲霉自溶。 d.青霉菌：在pH很低下能够生长。提前放罐。 ④发酵后期污染 染菌量不太多，可继续发酵。 污染严重，则提前放罐。 杀菌剂的添加：前期无必要，增加成本； 发现后加入，效果要具体评价。;（4）杂菌污染对发酵产物提取和产品质量的影响;二、杂菌污染的防治;(4)发酵过程的异常现象判断 DO2水平异常变化： pH异常变化： 污染产酸菌或者利用碳源效率高生长较快的杂菌 尾气CO2异常变化： 染菌引起糖的消耗变化，染好氧性杂菌，糖耗加快， CO2含量增加；染噬菌体，糖耗减慢， CO2含量减少。;1;2. 污染原因分析 ;(1)从杂菌种类看： 耐热芽孢杆菌：与灭菌不彻底有关。 球菌、无芽孢杆菌：与种子带菌、 无菌空气带菌、 设备渗漏、操作失误有关。 浅绿色菌落的杂菌：与水有关，即冷却盘管渗漏 霉菌：与操作失误、 技术管理不善有关，即无菌室灭菌不彻底或操作问题。 酵母菌：糖液灭菌不彻底或放置时间较长。 ;(2)从污染时间看： 早期污染可能与?种子带菌、无菌空气带菌、灭菌不彻底 、操作失误 有关。 后期污染可能与设备渗漏、操作失误及中间补料有关。 (3)从染菌幅度看： 各个发酵罐或多数发酵罐染菌，且所污染的是同一种杂菌，一般是空气系统问题。 个别罐连续染菌，一般是设备问题。;3、杂菌污染的途径及其预防;(3)设备的渗漏或“死角”造成的染菌及其防治;;法兰连接不当造成的“死角” ;灭菌时蒸汽不易通达的“死角”及其消除方法;设备渗漏引起的染菌及其防止 发酵设备、管道、阀门长期使用，由于腐蚀、摩擦和振动等原因，造成渗漏。 方法：选用优质的材料，并定期进行检查。 微小渗漏的检查：加入碱性水，用浸湿酚酞 指示剂的白布擦，有渗漏则白布显红色。 ;(4)培养基与设备灭菌不彻底的防治 原料性状：大颗粒的原料过筛除去。 假压：实罐灭菌时要充分排除罐内冷空气。 灭菌过程中产生的泡沫造成染菌：添加消泡剂，防止泡沫升顶。 连消不彻底 ：蒸汽压力波动大，培养基未达到灭菌温度，最好采用自动控制装置 。 灭菌后期罐压骤变：灭菌后，冷却水冷却时，如冷却过快造成罐内负压造成染菌。冷却前先通入无菌空气维持罐内一定的正压，再进行冷却 。 死角 ：消除。;(5)操作不当造成染菌 移种时或发酵过程中，罐内压力跌至零。 管道阀门操作不当，无菌空气的压力突然下降，罐内压力高，发酵液倒流进入与发酵罐液面下相连的各个管道以及空气过滤器 。 (6)噬菌体染菌及其防治 以净化环境为中心的综合防治法。 ;采取哪些措施能够保持无菌发酵？;培养基灭菌的定义 是指从培养基中杀灭有生活能力的细菌营养体及其芽孢或孢子，或从中将其除去。 工业规模的液体培养基灭菌，杀灭杂菌比除去杂菌更为常用。 灭菌与消毒的区别 灭菌：用物理或化学方法杀死或除去环境中所有微生物，包括营养细胞、细菌芽孢和孢子。 消毒：用物理或化学方法杀死物料、容器、器皿表面的微生物。;1.化学试剂灭菌法 ; 湿热灭菌的优点： 蒸汽来源容易，操作费用低，本身无毒； 蒸汽有强的穿透力，灭菌易于彻底； 蒸汽有很大的潜热（冷凝热）； 操作方便，易管理。;热阻 ;当温度T一定时，k随微生物不同而不同，具体计算时，可取细菌芽孢的k值为标准。 当 T 变化时，k有很大变化，其变化遵从阿累尼乌斯定律 k=Aexp(- △E/RT) ∴ k与微生物活化能及T有关 ;大肠杆菌在不同温度下 的残留曲线;影响培养基灭菌的其它因素 ;pH：pH6.0-8.0，微生物最耐热，pH6.0，H+易渗入微生物细胞内，改变细胞的生理反应促使其死亡。∴培养基pH愈