病毒转基因技术原理 概述.pptVIP

问题 社会公众对健康需求的增加 生命科学和医学研究的推动 对转基因技术的安全和伦理关注持续增加。 课程内容 分为理论课与实践课 转基因技术概述 病毒转基因技术原理、纯化制备技术和医学应用 生物安全 医学伦理问题 表达外源基因的复制缺陷型重组腺病毒的构建和鉴定 DNA病毒 RNA病毒 杂合病毒 第一章 转基因技术概述 范雄林 86-27xlfan@hust.edu.cn 华中科技大学同济医学院病原生物学系 研究生高水平课程——《病毒转基因技术原理》 主要内容 基因转移方式 真核细胞的转基因技术 外源基因表达读框的构建原理 1. 定 义 基因转移（gene transfer）: 自然发生 转基因技术(transgene technology): 人工利用 2. 常见的基因转移方式 转化(transformation) 转导(transduction ) 转染 (transfection) 现象 定义 分类 用途 转化 （transformation ） 现象: 肺炎链球菌的转化试验 定义: 分类和应用:自然转化:感受态,宿主菌种类 人工转化: 低温CaCl2、电穿孔 小鼠的肺炎链球菌的转化试验 转导(transduction ) 现象:“U”型管实验 定义: 分类和应用:普遍性转导 局限性转导 局限性转导 转染 (transfection) 现象: 感染(infection)、病毒感染 定义: 广义和狭义 分类和应用:物理化学方法 生物学方法(病毒载体) 野生型病毒的自然感染、病毒载体转染和质粒经化学法介导的转染 3. 基因转移入真核细胞的方法 基因转移入真核细胞的影响因素 外源基因转移入真核细胞的类型和方法 构建外源基因的基本要素 转移入原核细胞的影响因素: 限制-修饰系统 质粒宿主范围和相容性 同源重组与非同源重组 基因转移入真核细胞的影响因素 真核与原核细胞具有显著区别; 外源基因要进入真核细胞，要突破三大障碍; 理想的转基因技术方法 质粒型载体: 物理方法 化学方法 外源基因转移入真核细胞的类型和方法 传统的针头注射 显微注射 粒子轰击 电穿孔 流体动力学 包裹微球 超声 磷酸钙法 脂质体法 DEAE-Dxtran法 常用的物理方法介导基因转移