第九章原核表达.pptVIP

;相关基本概念 乳糖操纵子模型及调控机制 色氨酸操纵子模型及调控机制 翻译水平的调控 真核生物的调控 ;重点： 乳糖、色氨酸操纵子调控的机制 难点： 阻遏蛋白与诱导物操作子的相互作用 cAMP-CAP的正调控作用 ;1、基因表达的多级调控;基因表达的调控方式: 阻遏 负调控:调控蛋白+DNA序列 基因的表达 (相应蛋白质降低) 促进 正调控:调控蛋白+DNA序列 基因的表达 (相应蛋白质增加);;乳糖操纵子模型的建立(Jacob and Monod,1961);第一节 操纵子学说;乳糖操纵子(lactose operon);启动子;乳糖操纵子结构;Z编码β-半乳糖苷酶：将乳糖水解成葡萄糖和半乳糖 Y编码β-半乳糖苷透过酶：使外界的β-半乳糖苷（如乳糖）能透过大肠杆菌细胞壁和原生质膜进入细胞内。 A编码β-半乳糖苷乙酰基转移酶：乙酰辅酶A上的乙酰基转到β-半乳糖苷上，形成乙酰半乳糖。;E.coli对乳糖的利用及其相关的酶: 乳糖 (在通透酶作用下进入细菌） β半乳糖苷酶 （细菌中少量存在） 别位乳糖 β半乳糖苷酶 （细菌中少量存在） 葡萄糖+半乳糖 ;;分解底物的酶只有在底物存在时才出现。 　　　无乳糖：　〈５个分子的半乳糖苷酶 　　　有乳糖：　５０００个半乳糖苷酶分子　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　／２－３分钟 　　　　　　　　５％－１０％（蛋白总量）;乳糖操纵子的调控机制;I;;; Lac阻遏物的作用---负调控; 生理性诱导剂 实验常用诱导剂 ;No lactose:repressor LacI; 对称轴，+11 对称序列，6bp;; 2）当培养基中存在乳糖时， - 作为诱导物的乳糖与阻遏蛋白结合并改变阻遏蛋白的构象， 使之不能与操纵基因O结合，RNA聚合酶就可以与启动基因即lacP结合，从而转录lacZ, lacY, lacA基因。; 2. CAP-cAMP复合物 ---乳糖操纵子的??调控;;Catabolite repression of lac operon;Catabolite repression of lac operon; 3.葡萄糖和乳糖 在乳糖操纵子表达中的协调调控;;细菌以葡萄糖为能量来源 葡萄糖充分时： 与葡萄糖代谢有关的酶基因---表达 与其他糖代谢有关的酶基因---关闭 葡萄糖耗尽时，乳糖存在（培养基）： 与乳糖代谢有关的酶基因 ---表达 与葡萄糖代谢有关的酶基因---关闭; 当阻遏蛋白封闭转录时，CAP对该系统不能发挥作用。如无CAP存在，即使没有阻遏蛋白与操纵序列结合，操纵子仍无转录活性。 cAMP—CAP复合物与启动子区的结合是转录起始所必需的。;原核生物基因表达的一般情况（乳糖操纵子） ;第二节 色氨酸操纵子（trp operon）;一、色氨酸操纵子的结构 调控基因 结构基因 催化分枝酸转变为色氨酸的酶;特点: (1) trpR和trpABCDE不连锁； (2) 操纵基因在启动子内 (3) 有衰减子(attenuator)/弱化子 (4) 启动子和结构基因不直接相连，二者被 前导序列(Leader)所隔开 ;二、trp 操纵子的阻遏系统;Trp ;三、trp 操纵子的弱化机制;1、衰减子：DNA中可导致转录过早终止的一段核甘酸序列（123-150区）。 ; 研究引起终止的mRNA碱基序列，发现该区mRNA通过自我配对可以形成茎-环结构，有典型的终止子特点。;2、前导序列：在trp mRNA5‘端trpE基因的起始密码 前一个长162bp的mRN