第九章微生物与基因工程上.pptVIP

弱化子 如果在操纵基因和trpE基因编码序列之间的一段序列缺失，会导致基本转录水平和活化 (解阻抑)--转录水平的上升。该段序列称为弱化子，它位于trpE起始密码子前面162bp的转录前导序列的123～150位。 弱化子是一个不依赖ρ因子的终止子区域，在一小段富含GC的回文结构之后是8个连续的U残基。如果这段序列能在RNA转录物中形成发夹结构，就可以作为一个高效的转录终止子，因而只有140bp的转录物被合成。 第九章微生物与基因工程上 第九章微生物与基因工程上 前导RNA结构 色氨酸操纵子RNA的前导序列含有4个序列互补区，能形成不同的碱基配对的RNA结构。它们被称为序列1、2、3和4。 弱化子发夹结构是序列3和4配对的产物 (3:4结构)。 序列1和2也是互补的，能形成另一个发夹结构1:2。然而序列2还和序列3互补。 如果序列2和3形成2:3发夹结构，3:4弱化子发夹结构就不能形成，转录就不会终止。在正常情况下，1:2和3:4发夹结构的形成在能量上是有利的。 第九章微生物与基因工程上 第九章微生物与基因工程上 弱化作用 大肠杆菌中，翻译在mRNA边转录时边进行。色氨酸前导肽编码序列的3‘端与互补序列1重叠，两个色氨酸密码子都在序列1内，终止密码子在序列1和2之间。 由于色氨酸 (色氨酸操纵子的最终产物)是翻译过程中所必需的，因此细胞对它的含量很敏感，它决定了在mRNA中终止子(3:4)发夹结构是否形成。 第九章微生物与基因工程上 在色氨酸操纵子转录进行的过程中，RNA聚合酶在序列2的末端停滞直到核糖体开始翻译前导肽（即当前导肽开始翻译时，RNA聚合酶才又继续沿DNA模板链前进合成RNA）。 在色氨酸含量很高的情况下，核糖体迅速在两个色氨酸密码子处插入色氨酸，这样翻译可直达前肽导末端。核糖体封闭了序列2，当RNA聚合酶把3区和4区转录出来时，3:4发夹得以形成，当RNA聚合酶到达终止序列时，由于3:4发夹使转录可能被终止。这一过程被称为弱化作用。 第九章微生物与基因工程上 图9－20 弱化作用模型 第九章微生物与基因工程上 如果色氨酸缺乏时，翻译过程中将缺少其氨酰－tRNA，核糖体将在两个色氨酸密码子上滞留，封闭了序列1。这使得序列2能自由地与序列3形成发夹结构（即抗终止子）。终止子 (3:4)发夹结构不能形成，转录继续到trpE及其下游。 因此终产物色氨酸含量的高低决定了转录是提早终止 (弱化)，还是继续转录完整个操纵子。 第九章微生物与基因工程上 弱化的重要性 依靠弱化作用，色氨酸的存在就使色氨酸操纵子的转录被抑制了10倍。与色氨酸阻抑物的作用 (70倍)合在一起，这就意味着色氨酸水平对色氨酸操纵子的表达施加了700倍的调节效果。 在六种与氨基酸的生物合成相关的操纵子中有弱化作用。例如his操纵子含有编码一个有连续7个组氨酸密码子的多肽的前导序列。 第九章微生物与基因工程上 三 细菌应急反应 当细菌发现它们自己生长在饥饿的条件下，缺乏维持蛋白质合成的氨基酸时，它们将大部分活性区域都关闭掉。此就称为严紧反应(strigent response)，这是它们抵御不良条件，保存自己的一种机制。 严紧反应导致两种特殊核苷酸积聚：(1)ppGpp—四磷酸鸟苷（在G的5和3位点各附着两个磷酸）;(2) pppGpp—五磷酸鸟苷（鸟苷5一三磷酸-3二磷酸）。 人们最初发现细菌在氨基酸饥饿时，出现两种特殊的核苷酸，其电泳的迁移率和一般的核酸不同，感到很奇怪，就称之为“魔斑Ⅰ”和“魔斑Ⅱ”，后来发现魔斑Ⅰ便是ppGpp，魔斑Ⅱ是pppGpp。 第九章微生物与基因工程上 ppGpp有什么作用呢？它是一系列反应的效应物，包括抑制转录。 （1）rRNA操纵子的启动子其转录起始被严紧反应特异抑制了。严紧调节的启动子发生突变能消除严紧控制，表明此效应需要和特异启动子顺序相互作用； （2）很多或大部分模板的转录延伸阶段被ppGpp缩短了，此是RNA聚合酶停顿的增加而引起的。此效应反应了在细胞内加入ppGpp时转录效率普遍下降。 第九章微生物与基因工程上 四、通过σ因子更换的调控 枯草芽孢杆菌芽孢形成过程中，通过有序σ因子替换，使芽孢形成的基因有序表达。 热激应答反应：存在每一种生物中。HSP70热激蛋白感受温度变化后，调节热激应答系统的调节蛋白基因rPOH表达，产物是σ32，其参与构成的RNA聚合酶识别热激应答基因的启动子。 第九章微生物与基因工程上 五、信号传导和二组分调节系统 前面讨论的是小分子效应物与调节蛋白作用，而有时外部信号不直接传给调节蛋白。通过传感器检测信号，然后以变化形式传到调节部位，此为信号传导。最简单是二组分系统。 由：CM传感蛋白或传感激酶 （细胞质膜上） CP的应答调节蛋白 （细胞质） 第九章微生物与基因工