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园艺植物生物技术
Horticultural plant biotechnology
第12章 园艺植物遗传转化载体的构建
Chapter 11 Genetic transformation vector construction in Hort Plant
主要 内容
遗传转化载体功能与种类
Ti质粒遗传转化载体构建
Ri质粒与病毒载体遗传转化载体构建
载体构建选择标记基因和报告基因
园艺植物常用的遗传转化载体类型
target gene isolation
Genetic transformation
Construct the
expression vector
new transgenic
cultivars
Selection of transformed cell and
positive Transgenic plant identification of transgenic plants
一、遗传转化载体功能与种类
1、有效的植物遗传转化载体须具备功能
能作为媒介将外源基因导入细胞，整合到宿主细胞gDNA上
能提供被宿主细胞复制和转录系统所识别的DNA序列，即启
动子和复制子起始位点 ，以保证转化的外源基因能在细胞中
进行复制和表达
分离基因 克隆到某中间载体 pBS,pBR322,pGEM-T
转化大肠杆菌 DH5α, JM109, TOP10…
提取质粒
限制酶切/连接 Hind III / EcoRI… T4 ligase
克隆到植物表达载体 pBI121, pCAM1001 …
转化农杆菌 LBA4404, EHA105
遗传转化
2、植物基因工程转化载体的种类
Ti质粒载体 共整合载体系统
质粒载体
Ri质粒载体 双元载体系统
单链RNA病毒载体
反转录病毒载体
病毒载体
单链DNA病毒载体
双链DNA病毒载体
二、Ti质粒遗传转化载体构建
1. Ti质粒结构与功能
根癌农杆菌
Ti质粒
• 细菌质粒
• 自然存在于土壤农杆菌细胞
• 土壤农杆菌可感染大多数双子叶植物
的受伤部位，使之产生冠瘿瘤tumor-
Tumor induced by
inducing plasmid A. tumefaciens
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