土豆磷酸化酶的分离及直链淀粉的酶合成.pptVIP

4.实验步骤 用于酶法合成的沉淀 沉淀 土豆泥 土豆 4.1 分离纯化土豆磷酸化酶的步骤 1.粉碎 2.打成匀浆 1.加硫酸铵 2.离心 1.溶于水 2.加硫酸铵（350g/L) 化学生物学实验 6学时 1.离心 2.调pH至7.0 3.55℃搅拌40min 4.加硫酸铵（100g/L) 5.离心 4.实验步骤 STEP 1 STEP 2 STEP 3 STEP 4 将2.5Kg土豆去皮，切成小块在粉碎机中打成匀浆。匀浆在5000r/min离心30min，将上清液用Tris缓冲液调至7.0，并在55摄氏度加热40min 将上述混合物冷却至室温，按每升液体加入100g固体硫酸铵 搅拌30min并在5000r/min离心后，再按每升液体250g硫酸铵加入上清液中。 搅拌30min，离心，并收集沉淀置于500mL蒸馏水中，并向其中加入175g硫酸铵。搅拌30min，离心（10000r/min，30min）分出酶 化学生物学实验 6学时 4.1 分离纯化土豆磷酸化酶的步骤 4.实验步骤 进行反应 生成产物 产物检测 葡萄糖-1-磷酸酯 + 引物 直链淀粉 + Pi 比色法测定 化学生物学实验 6学时 P.PH 4.2 直链淀粉的合成及比色测定 从葡萄糖-1-磷酸酯酶法合成直链淀粉的反应图示 4.实验步骤 2.将1.1g（2.9mmol）葡萄糖-1-磷酸酯二钾盐水合物和7mg麦芽七糖溶于5