产品检验技术产品检验技术项目四任务5鸡新城疫疫苗效价检验.docVIP

第 PAGE 1页（共 NUMPAGES 6页） 《生物产品检验技术》 教学情境四 鸡新城疫疫苗质量检验（6学时） 任务三 鸡新城疫疫苗无菌检验 知识目标 了解鸡新城疫疫苗的装量规格。 掌握装量检验的程序 掌握病毒的灭活检验方法 掌握鉴别的方法 技能目标 1.能准确进行无菌取样； 2.会进行病毒的鸡胚接种； 3.能在超净工作台中进行无菌操作； 4.会进行血凝、血凝实验操作； 素质目标 1.养成严格按照国家质量标准和标准操作规程进行操作的工作作风； 任务完成方案 1.学生每5人一组按标准样品处理方案；5分钟 2.教师审核后指导学生进行无菌操作；10分钟 3.疫苗的装量检查；45分钟 4.疫苗的一般检验；45分钟 5.教师讲解示范鸡胚接种；15分钟 6.教师指导学生正确的鸡胚接种；20分钟 7．教师指导学生进行血凝试验的操作；45分钟 6.评价与总结、布置作业。45分钟 任务实施过程 一、鸡新城疫疫苗效力测定 1.病毒的鸡胚接种与效力测定 方法：（1）病毒的尿囊腔、羊膜腔接种 取疫苗原倍、10倍 102 、103…….10n倍稀释的病毒液分组接种鸡胚尿囊腔，每组接种10枚9一11日龄鸡胚，每胚接种0. 2m1,置33-35℃培养72小时。24小时内死亡的不计数，每组鸡胚须至少存活80%。自存活的鸡胚中每胚取0. 5m1尿囊液甲按组混合后，再盲传一代，每组各接种10枚胚，每胚接种0.2m1,经33-35℃培养72小时后，取尿囊液进行血凝试验，结果应不出现血凝反应。 （2）病毒的血凝实验 血凝实验材料： 1、抗原：病毒或其稳定浓缩抗原 2、抗体：抗新城疫阳性血清 3、红细胞：1%的鸡红细胞悬液 4、稀释液：0.9%的生理盐水 5、血凝板、微量加液器、吸头、微量振荡器 操作 1、血凝实验：测定抗原的血凝效价 （1）用微量加样器取50微升生理盐水加入血凝板各孔 （2）用微量加液器换一个新的吸头，取50微升鸡新城疫抗原液，加入第1孔，然后，通过微量加样器通过吸入、排除等方式将抗原液与稀释液混匀，从第1孔中取出50微升加入第2孔，混匀后再取50微升加入第3孔，依次作系列的稀释，稀释度分别是1：2，1：4，1：8，1：16，1：32，1：64，1：128等，最后从第11孔取50微升弃取，第12孔为对照。 （3）换新的吸头用微量移液器（加液器）取50微升红细胞逐次加入每个孔中。 （4）将血凝板置于微型振荡器上振荡1分钟，使红细胞与抗原充分接触。然后，放置一段时间观察结果。 （5）结果判定：红细胞均匀铺在孔底为完全凝集。以出现红细胞完全凝集为抗原液的最大稀释倍数，称为该抗原液的血凝效价。出现完全凝集最大稀释倍数的抗原液50微升为1个血凝单位。 五.总结评价与布置作业 （实验室24小时开放，学生课余时间完成，教师助手检查、考核） 作业目标：因为以上试验都是需要时间的，所以，大家要注意观察自己试验的结果，注意随时跟踪自己的试验结果。