分子生物学实验A343006实验教学大纲.docx

分子生物学实验A （ 343006 ）实验教学大纲 01.教学单位名称：生命科学学院 02 .实验中心名称：吉林大学国家级生物实验教学示范中心 03 .课程名称：分子生物学实验A 04?课程代码：343006 05 .课程类别:学科書出课 06 ?课程性质:必修 07 .课程学时：64 08 .课程学分：2 09 .面向专业：生物科学、生物技术、理科实验班 .实验课程的教学任务,要求和教学目的 10.1教学任务: 是让学生运用已学过的知识验证一些结论、结果和现象，及综合运用已学过的 理论知识设计实验或进行综合性的实验，巩固和加深对分子生物学课程中基本理论 知识的理解，使学生对分子生物学方法的应用和意义有具体而全面的理解，训练学 生理论知识的运用能力、实验操作技能、仪器仪表的使用能力、实验数据的处理和 分析能力。 10.2教学要求： 要求学生在实验前认真听教I師讲解，认真预习，掌握实验的基本原理、主要操 作步骤和注意事项。实验中操作正确，观察细致，记录认真，能及时发现、分析和 解决实验中出现的问题。正确书写实验报告，并对实验结果进行分析讨论，从而将 理论与实际联系起来，全面提高学生的综合素质。 10.3教学目的： 通过本课程的教学，使学生掌握现代分子生物学硏究的基本知识、理论、方法、 技术和技能。通过质粒载体与目的基因双酶切，琼脂糖凝胶电泳、琼脂糖凝胶回收』 质粒载体与目的基因的连接，感受态细胞的CaCI2法制备，重组DNA的转化，重 组子的筛选和质粒DNA的抽提以及PCR法鉴定阳性克隆等实验过程，使学生拿握 基因工程的核心内容、基本过程与实验技术，训练并培养学生的实际动手能力及发 现、分析和解决问题的能力。利用分子生物学实验理论、技术与方法（含查资料获 得的新知识），自己独立设计实验方案并完成填报设计实验申请书的全过程，培养学 生查阅文献、手册、工具书和其它信息源的能力及各种文献整理的能力。从而促进 学生对生命科学探索的兴趣和爰好、创新思维和科硏素养的培养及综合素质的提高, 为今后的毕业论文设计和从事专业相关领域工作奠定良好的基础。 ?学生应掌握的实验技术及实验能力 11.1掌握DNA双酶切、连接，琼脂糖凝胶电泳、琼脂糖凝胶回收、CaCb法制 备感受态细胞、重组DNA的转化和质粒抽提以及PCR法鉴定阳性克隆等实验技术 和方法； 11.2掌握核酸芯片设计与制作、微阵列芯片检测与数据分析等实验技术与方法； 113 DNA和RNA提取技术；PCR - RFLP法鉴定基因型技术;Southern印记 杂交技术；动物转基因技术的实验原理;核酸探针?J备技术。 .开设实验项目 重组人白介素-18（「hIL-18）基因工程菌的构建。主要内容包括：限制性内切酶 EcoR I和Pst I双酶切pUC18质粒和IL-18目的基因,琼脂糖凝胶电泳检测，凝胶 回收两个基因片段，在T4-DNA ligase作用下将两个回收片段连接，获得重组pUC 18-IL-18 ; CaCI2 法制备 E.coli JM109 感受态细胞,转化 pUC 18-IL-18 ,用 PCR 法鉴定重组阳性克隆。 头发中抽提DNA并用PCR - RFLP法鉴定CYP2C9基因型。主要内容包括：从 头发中抽提DNA ,并用PCR扩増目的DNA片段，电泳检测后，进行限制性内切酶 酶切，检测酶切位点，用PCR - RFLP法鉴定CYP2C9基因型。 蛋日质印迹分析。主要内容包括：主要内容包括：将目的蛋白进行SDS电泳，目的蛋白质转移到纤维素膜上，考马斯亮蓝染色后观察、染色结果分析。 DNA探针的制备和标记。主要内容包括：利用大肠杆菌DNA聚合酶的3’外 切核酸酶活性从5末端切除核酸，同时在DNA聚合88的5聚合酶活性的催化下 将dNTP添加到切口的3末端，5’末端核苻酸的去除与3’末端核百酸的加人同 时进行，导致切口随看DNA链移动由具有荧光素标记的核苜酸置换了原来的核甘 酸，可合成具有荧光素标记的DNA探针。 Southern印迹法。主要内容包括：将待检测的DNA样品固定在固相载体上， 与标记的核酸探针逬行杂交，在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交 信号。通过Southern杂交判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源的片段以及 该片段的长度。 RNA的Northern杂交。主要内容包括：RNA分离；将RNA固定到支持物 上;固相RNA与探针分子杂交;对特异结合的探针分子的图像进行检测、捕获和分 析。 真核生物cDNA文库的构建和分析。主要内容包括以生物细胞的总mRNA为 模板，用逆转录酶合成互补的双链cDNA ,然后接到载体上，转入到宿主后建立的 基因文库就是cDNA文库。 电穿孔法转染哺乳动物细胞。主要内容包括：将盛有细胞和DNA混合液的特 制小容器置于电泳冲仪