细胞培养技术1.pdfVIP

细胞房注意事项 1. 进出细胞房必须换拖鞋，勿将细胞房内拖鞋穿出细胞房，房 外拖鞋也不可进入房内。 2. 进入细胞房穿着专用白大褂， 勿将一楼动物实验的白大褂带 进细胞房。 3. 实验结束后及时清理台面，勿将垃圾留在实验台面。 4. 实验后及时清洗实验用品，勿将要洗的用品留在洗涤盆过 夜。 5. 实验后检查显微镜、超净台等实验仪器电源，确定已关方可 离开。 （显微镜在关闭电源前务必将光源调至最暗） 6. 注射器针头、玻璃等利器扔进利器盒，勿直接丢垃圾桶。 7. 培养瓶等放进培养箱前用 75%酒精消毒培养瓶表面， 水平放 置，若有培养液渗出培养箱，立即用 75%酒精擦拭。 8. 若发现细菌等污染，立即将培养瓶丢到黄色垃圾袋中，并及 时报告实验室工作人员，以及时对污染区域进行消毒。若培 养瓶要回收，应先用消毒水浸泡，再进行常规清洗消毒。 9. 在使用酒精灯过程中， 手上酒精挥发干后方可靠近酒精灯操 作，切勿将表面有酒精的物品靠近火苗。 细胞培养基本操作 无菌操作基本技术 1.实验进行前， 无菌室及无菌操作台 (laminar flow) 以紫外灯照射 30-60 分钟灭菌， 以 75 % 酒 精擦拭无菌操作台面， 并开启无菌操作台风扇运转 10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只 处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验 完毕后，将实验物品带出工作台， 以 75 % 酒精擦拭无菌操作台面。 操作间隔应让无菌操作台 运转 10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。 2.无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品， 例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以 暂时放置， 其它实验用品用完即应移出， 以利于气流之流通。 实验用品以 75 % 酒精擦拭后才 带入无菌操作台内。实验操作应在台面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。 3.小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。 勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开 之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约 45°角取用， 尽量 勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。 4.工作人员应注意自身之安全， 须穿戴实验衣及手套后才进行实验。 对于来自人类或是病毒感 染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台 (至少 Class II) 。操作过程中，应 避免引起气溶胶之产生，小心毒性药品，例如 DMSO 及 TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。 实验用品 1.细胞培养实验用品均为无菌，分玻璃容器和塑料无菌制品。 2.种类：培养瓶，培养皿，多孔培养板，巴氏管，离心管（ 15ml,50ml ）,玻璃血清瓶等。 3.清洗和消毒 3.1．玻璃器皿： A. 浸泡：新玻璃器皿，自来水初步清洗；使用后玻璃器皿立即浸入清水中，避免器皿内蛋白 质干涸黏附于玻璃上导致难以清洗。浸泡使器皿完全浸入水中，使水进入器皿内而无气泡空 隙遗留。 B.刷洗：浸泡后用毛刷加洗涤剂洗涤，刷洗后要将洗涤剂彻底冲洗干净，晾干。 C.清洁液浸泡：清洁液（重铬酸钾 +浓硫酸 +蒸馏水配成的次强酸）浸泡，可将玻璃器皿残留 未刷干净微量杂质完全清除，浸泡时，应使器皿内部完全充满清洁液，不留气泡，一般浸泡 过夜，或起码为 6H 以上。 D.冲洗：浸泡后器皿流水彻底清洗，每个器皿用流水灌满，倒掉，重复十次以上，直到清洁 液完全洗干净，用蒸馏水漂洗 2— 3 次，最后三蒸水漂洗一次，烘干待用。 3.2．塑料器皿：用后立即清水清洗，晾干，