食用菌生产技术菌种生产实验实训指导-菌种保藏及复壮.docxVIP

实训六 菌种保藏及复壮 一、实训目的 学会利用自然基质保藏菌种。掌握淘汰衰退菌丝的复壮法，能用数据证明菌种复壮前后的区别。 二、材料与用具 1.材料 麦粒、麦麸、母种、三角瓶装的培养基等 2.器具 试管、棉塞、装100ml水的三角瓶（有玻璃珠）、 装90ml水的试剂瓶、高压锅、接种环、接种箱、精精灯、火柴、干燥器、注射器或吸管等。 三、实训内容 1、复壮 （1）制备菌丝悬浮液 （2）制平板 （3）培养 （4）转管 2、保藏 （1）制备自然基质 （2）高压灭菌 （3）接种 （4）培养 （5）保藏 四、方法步骤 1.菌种保藏 （1）麸皮保藏法 将麸皮和自来水按1:1比例拌匀，装入试管，装量约占试管高度的1/3，洗净管壁，堵棉塞，扎捆后进行高压灭菌（152kpa、30min），经无菌检查后接入绿豆粒大的母种。在适温下培养至菌丝长满麸皮。 将菌种管置干燥器中放置一个月，换胶塞置冰箱中或低于20℃干燥条件下保存（1~2年）。 （2）麦粒保藏法 保藏菌种的麦粒含水量宜低，大约在25％。 将籽粒饱满的麦粒洗净，浸泡约5h，加水煮沸15min，使麦粒熟而不破，捞出沥干表面明水，装入试管，装量约占试管高度的2/5。高压蒸汽灭菌（152kpa、1h）。经无菌检查合格后接入菌种，在适温下培养至菌丝长满麦粒。 将菌种管置干燥器中放置一个月，换胶塞置冰箱中或低于20℃干燥条件下保存（1~2 2.菌种复壮 （1）制备菌丝悬浮液 将待复壮菌种的菌丝体刮下，置入100ml有玻璃珠的无菌水三角瓶中，充分摇荡，使菌丝分散。吸取10ml菌丝液注入盛有90ml无菌水的小瓶中，摇匀备用。 （2）制混合平板 将融化的PDA培养基倒入无菌培养皿中，凝固后滴入2~3滴菌丝液，用无菌涂棒涂抹，使菌丝均匀分散于平板上。 （3）培养 适温下培养，使菌丝萌发生长。挑取健壮尖端菌丝转管。 （4）检测 通过菌丝形态特征的检查及出菇试验等项目测定，符合原菌种性状即可用于生产。 五、作业 1.记录菌种在麦粒和麦麸基质上的生长情况，并对出现的问题进行分析。 2.麦粒与麦麸在处理方法上有哪些不同？ 3.本实验采用的菌种复壮法的原理是什么？ 4.试设计一个防治菌种衰退的菌种使用方案