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第二章 实验室仪器设备、器皿及用具;; 组织培养实验室布局的总体要求
便于隔离 便于操作 便于灭菌 便于观察;基本实验室;;植物组织培养实验室布局示意图;组织培养准备实验室;1.准备室;超声波清洗器; 面积60平方米左右,配备的主要仪器设备有 :冰箱、天平、微波炉、pH计、培养基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。冰箱以体积180-200L为宜,用于储存培养基母液、激素维生素等贵重药品、彩色胶卷、及保存植物材料。天平应有不同感量。; 配备实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细菌过滤设备、干热消毒柜、电炉等。灭菌锅的选择应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选用小型的医用手提式高压灭菌锅,较大的实验室可选用立式自动控制压力和温度的灭菌锅。 生产性的实验室可选用大型的卧式灭菌锅。 如果没有条件的话,可以将上述工作间合并成一个准备间,要求是设备的安装和排列要合理、房间要宽敞、明亮、透风,地面要便于清洁、防滑。;2.缓冲室; 无菌操作室主要用于实验材料的接种操作,所以又叫接种室。通常由里外两间组成,外间是缓冲间,用于准备工作,还有防止污染的作用。缓冲间的门应该与接种室的门错开,两个门也不要同时开启,以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间内应该设有水槽、实验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修,工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。 室内应配有超净工作台,紫外灯、解剖镜、各种接种器械等。 ;无菌室;; 为了控制培养室的温度和光照时间及其强度,培养室的房间不要窗户,但应当留一个通气窗,并安上排气扇。室内温度由空调控制,光照由日光灯控制。天花板和内墙最好用塑料钢板装修,地面用水磨石或瓷砖铺设,一般要分两间,一为光照培养室,一为暗培养。培养室外应有一预备间或走廊。 培养室应配有培养架、转床、摇床、光照培养箱、生化培养箱、自动控时器等。日光灯一般用40W??固定在培养架的侧面或搁板的下面,每层有两支日光灯,距离在20cm,光照强度为2000-3000lx。;设计组培实验室时的注意事项
为了减少污染,实验室最好设一走廊且走廊上方最好安装紫外灯;
培养室最好设在南面,设大玻璃窗,以双层玻璃窗为最好。如果培养室是设在房屋的边侧,其东边或西边的墙上也可设置大玻璃窗;
培养室房间及门要小,而且密闭性要好,最好装移门;
无菌操作室要小,要设缓冲间,也最好装移门,且门要稍大一些。;二、仪器与设备;酸度计;天平;培养基分装器;2、灭菌设备
蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。;蒸汽压力灭菌锅;干热消毒柜;无菌瓶顶过滤装置;接种器具消毒器;3、无菌操作设备 ;无菌接种箱;4、细胞培养设备 ;培养架;恒温振荡培养箱;5、细胞学鉴定设备
光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜;1、玻璃器皿;2、金属材质用具;1、玻璃器皿洗涤;清洗后器皿内外不可挂有水珠,否则重洗,若重洗后仍挂有水珠,则需用洗液浸泡数小时后(或用去污粉擦洗),重新清洗。;2、塑料用品洗涤; 金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤(新的可以用热洗衣粉水洗净),需要清洗时,一般用酒精擦洗,然后火焰干燥。 ;(一)、灭菌工作是极其重要的。 首先应建立有菌和无菌的概念有菌的范畴:有菌:凡是暴露在空气中的物体,至少其表面都是有菌的。如植物的表面、超净工作台的台面,未处理的工具和手等。 无菌:高压高温处理(工具、器皿、培养基等) 物理或化学处理; 火烤后的物体; 健康的动植物不与内外部表面接触的组织 内部可能是无菌的(有时也有内生菌,但 不会影响培养,也不会污染);1、物理方法:干热、湿热、过滤(0.25微米)紫外灯、超声波等。 2、化学方法:使用灭菌剂或抗菌素,如酒精、次氯酸钠、升汞、漂白粉、高锰酸钾、双氧水、福尔马林等。 ;干热灭菌 玻璃器皿、器械
湿热灭菌 培养基、蒸馏水、器械、棉塞等
熏蒸灭菌 接种室、培养室
过滤灭菌 液体培养基、蒸馏水
药剂灭菌 培养材料
烧灼灭菌 器械、瓶口、棉塞、包头纸
辐射灭菌 接种室、培养间; 适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。操作方
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