临床生化检验：8-方法学评价 干扰试验.ppt

方法学评价—干扰试验 * 方法学评价试验 方法学评价的基本内容是通过实验途径，测定并评价方法的精密度和准确度。 评价方法准确度的常用实验有： 方法比较实验、回收试验和干扰试验 评价方法精密度的常用实验有：重复性试验（包括批内重复性试验、日内重复性试验和日间重复性试验） 评价实验过程是对误差的测定。 分析误差的类型有：偶然误差、恒定误差、比例误差 * 实验目的 掌握方法学干扰实验的设计原理和基本方法及统计分析； 熟悉重干扰实验的注意事项和评价标准；客观评价GOD-POD法测血糖恒定系统误差的大小。以衡量候选方法的准确度。 * 干扰试验的相关概念 干扰试验是测定实验方法特异性差和干扰二者引起的误差。 特异性差：加入的物质本身和分析试剂反应并产生读数。 干扰：加入物质并不与分析试剂反应，但它改变了分析物和分析试剂间的反应。 * 干扰实验原理 干扰试验用来衡量测定方法准确度，在加入一定浓度干扰物质的条件下，形成恒定系统误差。干扰物浓度不同，误差大小也不同。在试验中首先要确定可疑物质是否引起误差；若引起误差，再确定分析结果影响临床应用价值的最低干扰物浓度值。 * 本实验采用维生素C作为GOD-POD法测定血糖的干扰物质。 维生素C可以和GOD反应生成的H2O2发生还原反应，使部分H2O2不能参与第二步POD的偶联反应，从而降低显色强度，产生负的测定误差。因此，维生素C对该反应有干扰，但不是维生素C被测定。 干扰实验原理 * 试剂与器材 葡萄糖氧化酶法（GOD-POD）试剂盒 标准血清（6.971mmol/L） 标本：患者混合血清 750mg/L维生素C溶液 500mg/L维生素C溶液 250mg/L维生素C溶液 分光光度计 水浴箱 * GOD-POD法测定血清葡萄糖原理 Trinder反应 红色醌类化合物的生成量即其色泽的深浅在一定范围内与葡萄糖含量成正比。 * 操作步骤1-标本制备 U①基 础 管：血清0.9ml+0.1ml生理盐水 U②干扰管Ⅰ：血清0.9ml+750mg/L维生素C溶液0.1ml U③干扰管Ⅱ：血清0.9ml+500mg/L维生素C溶液0.1ml U④干扰管Ⅲ：血清0.9ml+250mg/L维生素C溶液0.1ml * 加入物（ml） B S U① U② U③ U④ 蒸馏水 0.03 — — — — — 标准血清 — 0.03 — — — — 基础U① — — 0.03 — — — 干扰U② — — — 0.03 — — 干扰U③ — — — — 0.03 — 干扰U④ — — — — — 0.03 试 剂 3 3 3 3 3 3 按表加入标本及试剂 操作步骤2-浓度测定 各管混匀，置37℃水浴中保温5分钟，在波长500nm处比色，以B管调零读取各管吸光度（A）。 * 结果计算-1 各测定管浓度计算 * 结果计算-2 干扰物加入浓度计算 干扰值计算 干扰率计算 * 干扰实验数据处理表格-1 各管A值 各管测定次数 平均A值 1 2 3 标准管 U① U② U③ U④ * 干扰实验数据处理表格-2 样品 测定浓度