临床生化检验：11-方法比较试验.ppt

方法比较试验 实验目的 掌握： 1.方法比较试验的原理和结果评价。 2.葡萄糖氧化酶法和已糖激酶法测定血清葡萄糖的原理。 熟悉： 葡萄糖氧化酶法和已糖激酶法测定血清葡萄糖的操作过程。 了解： 血清葡萄糖测定的临床意义。 方法比较试验 是用两种方法同时测定一批标本，计算出两种方法间测定结果的差值，以此来估计被评价方法在实际测定病人标本时可能引入的总系统误差的水平。 方法比较实验的用途 引进新的检测系统或测定方法 使用新的试剂盒、新仪器 同时使用两个或以上的检测系统测定相同的检测项目 必须首先确定各个检测系统的测定结果是否存在差异，这种差异是否在允许的误差范围之内，此时， 需要进行方法比对试验。 实验原理 方法比较试验是将候选方法与准确度已知的方法（如参考方法或经典方法）作对比，以评价候选方法的准确度。它可同时检测候选方法的恒定系统误差和比例误差的大小。本实验以HK法（已糖激酶法）测定血糖的方法作为参考方法，来评价GOD-POD法测定血糖的总系统误差。 参考方法：已糖激酶法（HK法） 候选方法：葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法） 已糖激酶法测定血糖的实验原理 还原型的NADPH的生成速度与葡萄糖成正比，在波长340nm有特异吸收峰，根据吸光度升高的速率，可计算血清中葡萄糖的浓度。 试剂与器材 GOD-POD试剂盒 HK试剂盒 葡萄糖标准液(己糖激酶法6.56mmol/L, 葡萄糖氧化酶法6.97mmol/L) 高低不同的血清标本40份 其中≥6.1mmol/L标本10份； 在3.9～6.1mmol/L之间的标本20份； 3.9mmol/L以下的标本10份。 可见、紫外分光光度计 水浴锅 方法比较步骤 样本数至少为40个标本，每个标本用两种方法分别作双份测定。 每天测定8个标本，双份测定时第一次顺序1，2……7，8，第二次8，7……2，1 共测五天。 实验室分组安排 每个实验室分为5组；一个组代表一天。 一个组测8个标本 每个标本用两种方法作双份测定（正序+倒序） 样品标记 标本随机排列进行编号 第一天：1，2，3，4，5，6，7，8 第二天：9，10，11，12，13，14，15，16 第三天：17，18，19，20，21，22，23，24 第四天：25，26，27，28，29，30，31，32 第五天：33，34，35，36，37，38，39，40 操作步骤（GOD-POD法） 加入物 B S U 蒸馏水 30μl — — 标准液 — 30 μl — 血 清 — — 30 μl 单一试剂 3ml 3ml 3ml 将每份标本分别用两种方法各测定二次，记录测定结果。 各管混匀，置37℃水浴中保温10分钟，在波长500nm处比色，以B管调零读取各管吸光度（A）。 操作步骤（HK法） 加入物 B S U 蒸馏水 30μl — — 标准液 — 30μl — 血 清 — — 30μl R1 2.4ml 2.4ml 2.4ml R2 0.6ml 0.6ml 0.6ml 将每份标本分别用两种方法各测定二次，记录测定结果。 将4份R1和1份R2试剂混合，作为工作试剂 各管混匀，置37℃水浴中水浴5分钟，在波长340nm处比色，以B管调零读取各管吸光度（A）。 数据处理表（各管吸光度值） 标本号 GOD-POD法（A） HK法（A） 第一次Y1 第二次Y2 第一次X1 第二次X2 1 2 3 4 5 6 7 8～40 数据处理表（各管测定结果） 标本号 GOD-POD法（mmol/L） HK法（mmol/L） 第一次Y1 第二次Y2 第一次X1 第二次X2 1 2 3 4 5 6 7～40 计算- 1.实验数据的初步检查 设HK法测定结果为X值,GOD-