临床生化检验：7-回收试验.ppt

回收试验 检验系生化教研室 方法学评价试验 方法学评价的基本内容是通过实验途径，测定并评价方法的精密度和准确度。 评价方法准确度的实验有： 方法比较实验、回收试验和干扰试验 评价方法精密度的常用实验有：重复性试验（批内、日内、和日间重复性试验） 评价实验过程是对误差的测定。 分析误差类型有：偶然误差、恒定误差、比例误差 实验目的 掌握：方法学回收试验的原理、操作步骤。 熟悉：回收试验的注意事项和评价标准。 回收试验的原理 回收试验是分析某方法正确测定加入常规分析样品中的纯分析物能力的试验，用于评价候选方法的比例系统误差。 通过GOD-POD（葡萄糖氧化酶法）测定血糖的回收率，能较确切地判断该分析方法比例系统误差的大小，从而评价方法的准确性。 回收实验可以对分析方法使用纯标准液为标准，检测样品为病人标本时的检验结果受基质效应的影响作出估计。 回收率接近100%，说明分析方法以对分析物无论在纯溶液中还是复杂的基质环境中，反应能力是一致的，即分析不受基质影响。 若回收率明显偏离100%，说明分析方法对于基质环境中的分析物的反应能力有明显差别 回收实验可以对分析方法受基质效应的影响作出估计。 回收试验的原理 试剂与器材 生理盐水 GOD-POD试剂盒单一试剂 葡萄糖标准液（80mmol/L） 标本：患者混合血清(2.2mmol/L) 标准血清（血糖浓度6.41mmol/L） 蒸馏水 GOD-POD法测血糖原理 葡萄糖在葡萄糖氧化酶（GOD）的作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢。后者与酚和4-氨基安替比林（4-AAP）在过氧化物酶（POD）的作用下生成红色的醌类化合物。可在500nm处检测，其颜色的深浅与葡萄糖含量成正比。 操作步骤-标本制备 U①基 础 管：血清0.9ml+0.1ml生理盐水 U②回收管Ⅰ：血清0.9ml+0.01ml 80mmol/L葡萄糖标准液+0.09ml生理盐水 U③回收管Ⅱ：血清0.9ml+0.06ml 80mmol/L葡萄糖标准液+0.04ml生理盐水 U④回收管Ⅲ：血清0.9ml+0.09ml 80mmol/L葡萄糖标准液+0.01ml生理盐水 操作步骤-血糖浓度测定 混匀，37℃水浴5分钟，在波长500nm处比色，以B管调零读取各管吸光度值。 加入物（ml） 蒸馏水 标准血清 U① U② U③ U④ R1试剂 B S U① U② U③ U④ 0.03 － － － － － － 0.03 － － － － － － 0.03 － － － － － － 0.03 － － － － － － － 0.03 3 3 3 3 3 3 － － － － 0.03 － 计算㈠ 加入浓度（mmol/L）=标准液浓度× 标准液用量（ml） 血清量（ml）+标准液用量（ml）+生理盐水量（ml） 3、回收量计算 2、加入浓度计算 回收量=回收管测定值－基础管测定值 1、各测定管浓度计算 测定管浓度（mmol/L）= AU AS ×6.41mmol/L 计算㈡ 4、回收率计算 回收率（%）= 回收量 加入浓度 ×100% 5、计算平均回收率 回收试验的数据处理 样品 测定浓度 加入浓度 回收浓度 回收率