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细胞生物学细胞生物学研究方式 1. 流式细胞技术 用途：对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术。 原理：包在鞘液中的细胞通过高频振荡控制的喷嘴，形成包含单个细胞的液滴，在激光束的照射下，这些细胞发出散射光和荧光，经探测器检测，转换为电信号，送入计算机处理，输出统计结果，并可根据这些性质分选出高纯度的细胞亚群，分离纯度可达99%。包被细胞的液流称为鞘液，所用仪器称为流式细胞计（flow cytometer）。 六、定量细胞化学分析技术 2. 显微光谱分析技术 细胞中有一些成分具有特定的吸收光谱，核酸、蛋白质、细胞色素、维生素等都有自己特征性的吸收曲线。 可利用显微分光光度计对某些成分进行定位、定性和定量测定。 第三节 细胞培养、细胞工程与显微操作技术 一、细胞培养 二、细胞工程 一、细胞培养 (一)、细胞培养的基本概念 (二)、动物细胞培养 (三)、植物细胞培养 (四) 非细胞体系在细胞生物学研究的作用 (一)、细胞培养的基本概念 选用最佳生存条件对活细胞进行培养和研究的技术。 动物细胞的生存环境与植物细胞差别很大，因而二者的培养方法很不相同。 (二)、动物细胞培养 1. 基本概念 原代细胞(primary culture cell) 从动物机体取出的进行培养的细胞群 。有人也把培养的第2代细胞与传10代以内的细胞统称为原代培养细胞。 有限细胞系(finite cell line) 从原代细胞群中筛选出的仍保持原来染色体的二倍体数量及接触抑制性，能够繁殖40-50代左右的传代细胞。 永生细胞系(infinite cell line) 细胞发生遗传突变，并带有癌细胞的特点，可能在培养条件下无限制地传代下去，这种传代细胞称为永生细胞系。 如：HeLa细胞系、BHK21细胞系、Vero细胞系、CHO细胞系 细胞株：具有特殊遗传标记或性质的细胞群体。 （二）动物细胞培养 2. 体外培养细胞的类型： 原代培养细胞 传代细胞：适应在体外持续传代培养的细胞 3. 细胞培养的类型 单层细胞培养 悬浮培养 4. 细胞的形态：成纤维样细胞、上皮样细胞 原 代 培 养 （二）植物细胞培养 植物细胞培养主要有如下几种技术： 原生质体培养 单倍体细胞培养 (四) 非细胞体系在细胞生物学研究的作用 非细胞体系：来源于细胞，而不具有完整的细胞结构，但包含了进行正常生物学反应所需的物质组成的体系。 如：非洲爪蟾卵提取物 Electron micrograph of a root-tip cell stained with osmium and other heavy metal ions. The cell wall, nucleus, vacuoles, mitochondria, endoplasmic reticulum, Golgi apparatus, and ribosomes are easily seen. 负染技术 用重金属盐(如磷钨酸) 染色；吸去染料干燥后，样品凹陷处铺了一层重金属盐，而凸出地方没有染料沉积，从而出现负染效果，分辨力可达1.5nm左右。 Negative Stained Archaebacteria Negative Stained Actin 冷冻蚀刻 freeze-etching 标本置于干冰（-78.5摄氏度）或液氮（-196摄氏度）中冰冻。用冷刀骤然将标本断开，然后升温，冰升华，暴露断面结构。向断面喷涂一层蒸汽铂和碳。然后用次氯酸钠将组织溶掉，把铂和碳的膜剥下来，此膜即为复膜（replica）。 Page 61 酵 母 细 胞 扫描电子显微镜（scanning electron microscope，SEM）于20世纪60年代问世，用来观察标本的表面结构。 （二）、扫描电子显微镜 工作原理 用一束极细的电子束扫描样品，在样品表面激发出次级电子，次级电子的多少与电子束入射角有关，也就是说与样品的表面结构有关，次级电子由探测体收集，并在那里被闪烁器转变为光信号，再经光电倍增管和放大器转变为电信号来控制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像。 图像为立体形象，反映了标本的表面结构。为了使标本表面发射出次级电子，标本在固定、脱水后，要喷涂上一层重金属微粒，重金属在电子束的轰击下发出次级电子信号。 三、扫描隧道显微镜 扫描隧道显微镜（scanning tunneling microscope，STM） 由Binnig等1981年发明，根据量子力学原理中的隧道效应而设计。 利用扫描隧道显微镜直接观察生物大分子，如DNA、RNA和蛋白质等分子的原子布阵和某些生物结构，如生物膜、细胞壁等的原子排列 原理