植物生化制药第五章核酸类药物.pptx

第五章 核酸类药物;第一节 概述; 98%分布于细胞核，其余分布于核外如线粒体，叶绿体。;;一、RNA的制备 （一）材料的选择与预处理 制备RNA的材料要选择含核酸量丰富的组织。 RNA的含量和细胞的活跃程度有关，在蛋白质合成旺盛的细胞中，其核酸的含量也相应地较高。;1. 酸处理法 将经酸和有机溶剂处理后的残留物用1mol/L的过氯酸液于4℃下处理18 h，从中抽提出RNA，沉淀部分再用0.5mol/L的过氯酸液70 ℃下处理20 min提取DNA。 此法的缺点是有些材料的DNA在冷过氯酸抽提时被少量提取，从而使RNA部分中混有少??的DNA。 2. 碱处理法 将残留物用1mol/L的NaOH溶液于37 ℃处理过夜，则RNA被碱解为碱溶性核苷酸，DNA不溶解。加入过氯酸或三氯乙酸使溶液酸化，至酸浓度为5%-10%,此时，RNA的分解产物溶解在上清液中，DNA等则被沉淀下来。此法的优点是RNA和DNA分开得较为彻底，缺点是RNA中还含有其他含磷化合物，如磷肽，磷酸肌醇等。;（二）提取与纯化;2. 纯化 （1）密度梯度离心法 （2）柱色谱法 （3）凝胶电泳法;（三）含量测定;二、DNA的制备;三、核苷酸、核苷及碱基的制备;光合磷酸化法制备ATP的工艺流程;ATP的药理作用与临床应用;第五章 酶类药物;第一节 概述 ;对酶类药物的要求;二、酶的分子组成及分类;2. 酶的分类;三、酶类药物的临床应用;;;第二节 酶类药物的一般制备方法;一、酶的原材料选择与预处理;（二）原材料的预处理;二、酶的提取 1. 水溶液法 常用稀盐溶液或缓冲液提取，经过预处理的原料，包括组织糜，匀浆，细胞颗粒，丙酮粉都可用水溶液抽提。 水溶液的pH选择对抽提具有影响，应考虑的因素有： ① 酶的稳定性 ② 酶的溶解性 ③ 酶与其他物质结合的性质 选择pH的总原则是，在酶稳定的pH范围内，选择偏离等电点的适当的pH。;2. 有机溶剂法 某些结合酶，由于和脂质结合牢固，需用有机溶剂除去脂质，且不能使酶变性。常用有机溶剂是丁醇。 丁醇性质：亲脂性强、兼具亲水性、在脂与水分子间能起表面活性剂的桥梁作用。 丁醇提取方法：均相法和两相法 3. 表面活性剂法 ;三、酶的纯化;（二）脱盐和浓缩 1. 脱盐 （1）透析 （2）凝胶过滤 2. 浓缩 （1）蒸发 （2）超滤法 （3）凝胶吸水法 （4）冷冻干燥法;（三）酶的结晶;四、酶活力的测定与纯度检验;五、菠萝蛋白酶;（一）化学性质和组成 白色至浅棕黄色无定形粉末。略溶于水，水溶液无色至淡黄色，有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚，为一种巯基酶。半胱氨酸能激活酶的活性，但受重金属抑制。最适pH7.0，相对分子量33000。 主要作用原理：使多肽类水解为低分子量的肽类。;;（三）检验方法;（3）测定步骤 ①适当稀释样品后，精密量取样品待测液1mL，置于具塞试管中，于，37℃预温10min，迅速加入37℃预温的酪蛋白溶液5mL，从开始加入起准确反应10min，加入三氯乙酸溶液5mL，混匀，保温10min后过滤。 ②另量取1mL待测样品液于37℃预温10min，精密加入三氯乙酸溶液5mL，准确反应10min，加入酪蛋白溶液5mL，摇匀，保温10min后过滤，滤液作为上述溶液的空白对照。用分光光度计在275nm的波长处测吸光度A。 ③以水做空白对照，在275nm的波长处测定50μg/mL酪氨酸吸光度A。;（四）菠萝蛋白酶在医药、保健品业的应用 　　1、抑制肿瘤细胞的生长 　　经相关临床研究观察表明，菠萝蛋白酶能抑制肿瘤细胞的生长。 　　2、对心血管疾病的防治 　　菠萝蛋白酶作为蛋白水解酶对心血管疾病的防治是有益的。它能抑制血小板聚集引起的心脏病发作和中风, 缓解心绞痛症状,缓和动脉收缩, 加速纤维蛋白原的分解。 　　3、用于烧伤脱痂 　　菠萝蛋白酶能选择性地除 皮, 使新皮移植得以尽早进行。动物实验证明, 菠萝蛋白酶对邻近的正常皮肤无不良影响。局部使用抗生素不影响菠萝蛋白酶的效果。 　　;4、消炎作用 　　菠萝蛋白酶在各种组织中能有效地治疗炎症和水肿(包括血栓静脉炎、骨骼肌损伤、血肿、口腔炎、糖尿病人溃疡及运动损伤)，菠萝蛋白酶具有激活炎症反应的潜力。菠萝蛋白酶还可治疗腹泻。 5、增进药物吸收 　　将菠萝蛋白酶与各种抗生素(如四环素, 阿莫西林等)联用, 能提高其疗效。相关研究表明, 它能促进抗生素在感染部位的传输, 从而减少抗生素的用药量。据推断, 对于抗癌药物, 也有类似的作用。此外，菠萝蛋白酶能促进营养物质的吸收。 ;第七章 多糖类药物;多糖的药理作用;（4）抗辐射损伤作用，抗射线的损伤，有抗氧化、防辐射作用。 （5）抗肿