乙醇沉淀DNA和异丙醇沉淀DNA区别.pdfVIP

乙醇沉淀dna和异丙醇沉淀dna的区别 异丙醇和酒精都是有机溶剂，一般来讲，提取质粒的时候一开 始都要用异丙醇沉淀，因为异丙醇沉淀的效果要好一些，但最 后大多用酒精沉淀，因为酒精容易挥发，对下游的实验影响小 异丙醇比较疏水，能很更好地沉淀核酸，用乙醇的目的是 去盐，它比异丙醇更亲水，所以能去掉一些盐离子。 有时还用 70%的乙醇洗样品也是为了增加盐的溶解度。 在沉淀核酸时可用乙醇与异丙醇，乙醇的极性要强于异丙醇， 所以一般用2倍体积乙醇沉淀，但在多糖、蛋白含量高时，用异 丙醇沉淀可部分克服这种污染，尤其用异丙醇在室温下沉淀对 摆脱多糖、杂蛋白污染更为有效。 异丙醇沉淀核酸时，高浓度盐存在将使大量多糖存在在溶 液中，从而可达到去多糖的作用。但高浓度的盐存在会影响核 酸的进一步操作，因此必须用乙醇多次洗涤脱盐。 异丙醇： 优点：所需容积小且速度快，适用于浓度低，而体积大DNA 样品的沉淀。0.54~1.0倍体积的异丙醇可选择性沉淀DNA和大分 子rRNA和mRNA；但对5sRNA、tRNA和多糖产物不产生沉淀，一般 不需要在低温条件下长时间放置。 缺点：易使盐类 （如NaCl、蔗糖）与DNA共沉淀；在DNA沉 淀中异丙醇难以挥发除去，所以常规需要用70％的乙醇漂洗DNA 沉淀数次。 乙醇： 沉淀DNA乙醇是首选的有机溶剂，对盐类沉淀少，DNA沉淀 中所含的衡量乙醇易蒸发去处，不影响以后的实验。在适当的 盐浓度下，2倍样品容积的95％乙醇可有效沉淀DNA，对于RNA则 需要将乙醇量增加至2.5倍.