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液相基础知识培训 一、液相色谱发展史 色谱分析法是分析化学中获得光泛应用的一个重要分支。色谱法最早是由俄国植物学家茨 维特(MSTs^tt)在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的,色谱法Chranatograph^ 因之得名经典液相色谱法)。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、 液相色谱法。 3口0年代发展了柱分配色谱和纸色谱。 50年代发展了气相色谱法和薄层色谱法。 60年代发展了凝胶色谱法及高效液相色谱法 70年代发展了高效毛细管气相色谱法。 80年代发展了毛细管电泳和电色谱。 90年代出现了光色谱。 60年代气相色谱对高沸点有机物分析局限性发展了液相色谱弥补气谱的不足。 高效液相色谱 High Perfonnance Liquid Chramtography 高压液相色谱 High Pressure Liquid Chromatography 高速液相色谱 High Speed Liquid Chrcmatography 高分离度液相色谱 High Resolution Liquid Chramatography 现代液相色谱 Modern Liquid Chranatography 比尔定律：一束平行单色光经过具有紫外线吸收作用的溶液时，透过溶液的光强度不仅与 溶液的浓度有关，而且还与溶液的厚度及溶液本身对光的吸收性能有关： 其中A为消光值，是透射光强I和发射光强10的比值的对数（反射光强度忽略不计）， 即 4 lgCQ^）； K为某溶液的消光（吸收）系数，一种有色溶液对于一定波长（单色光）的入射光的K值 具有一定数值。若溶液的浓度以iw/表示，溶液厚度以cm表示，则此时的K值称为 摩尔消光系数，它是有色化合物的重要特征之一； C为溶液的浓度； b为光程，即溶液的厚度。 该定律只适用于单色光和低浓度的有色溶液。 三、液相色谱组成: （一〉、主件 泵、进样阀、色谱柱、检测器、工作站（记录仪） （二八附件 过滤装置、脱气装置、柱温箱、收集装置等等。 （三〉、工作程序： 液体进入泵伍力传感器拯动缓冲器谥样阀咆谱柱检测器 （四）、泵体组成部分： 电机、马达、双柱塞串联泵腔、缓冲器、压力传感器、面贴 （五〉、检测器组成部分: 1、电器部分（变压器、氛灯板、系统电源伴、控制板、显示板、前置板、面贴） 2光学部分 你灯、灯箱、光学盒、凹面镜、分光镜、小参比、单色器、流通池、前置板） （六）、高效液相色谱的分类 1、吸附色谱 Adsorption Chromatography 用固体吸附剂作固定相，以不同极性溶剂做流动相依据样品中各组分在吸附剂上吸附性能 的差别来实现分离。 2 分配色谱 Partition Qiranatography 用载带在固相基体上的固定液做固定相，以不同极溶剂作流动相。依据样品中各组分在固 定液上分配性能的差别来实现分离。 i 离子色谱 Ion Qiranatography 用高效微粒离子交换剂作固定相，以具有定田值的缓冲液做流动相,依据离子型化合物 用高效微粒离子交换剂作固定相，以具有 定田值的缓冲液做流动相,依据离子型化合物 中各离子组分与离子交换剂上表面带电荷基团进行可逆离子交换能力的差别来实现分离。 4 体积排阻色谱 Size Exclusion Qircmatography 用化学惰性的多孔性凝胶做固定相，按固定相对样品中组分分子体积阻滞作用的差别来实 现分离。又分： Gel Filtration Chranatography （GFO以水为流动相的体积排阻色谱 b Gel Permeation Chranatography （GK）以有机溶剂为流动相的体积排阻色谱 乂亲和色谱 以在不同基体上，键合多种不同特性的特性的配位体做固定相用具有不同田值的缓冲溶液 作流动相，依据生物分子（氨基酸、肽、蛋白质、核碱、核酸、核昔酸、酶等）与基体上 键合的配位体之间存在的特异性亲和作用能力的差别而实现对具有生物活性的生物分子的 分离。 （七〉、什么样品目前不能用液相色谱分离 1、保留值大于相当于炭数为85的正构烷姪的保留值的同系物 2保留值大于相当于炭数为35的正构烷姪的保留值的烷姪同系物的混合物。 对于链状化合物的非极性位置异构体如姪类一般不能用液相色谱分离。 4对于间位、对位位置不同的非极性取代基的芳香异构体不能分离，特殊色谱柱可以分离。 ＞对于给定的柱系统中如果两相邻炭数的同系物之间的峰数大于其间的峰容量。 正相色谱法与反相色谱法比较表 正相色谱法 反相色谱法 固定相极性 高?中 中?低 流动相极性 低?中 中?高 组分洗脱次序 极性小先洗出 极性大先洗出 高效液相色谱法与经典液相色谱法的比较 高效液相色谱法 经典液相色谱法 色谱诸：柱长金 1口5 1O00 柱内径/fal O0